植物活性多糖对小鼠树突状细胞和巨噬细胞功能调节作用.pdf

摘要 摘要 自然界中植物种类多种多样，具有免疫调节作用的药用植物也是数量繁多， 如果能将其中起主要作用的有效成分分离出来，研究其理化性质及作用机理， 对于植物功能性因子的研究及相应功能食品的开发将具有非常重要的意义。 cell，APCs)主要承担对抗原物质的摄取， 抗原提呈细胞(antigen-presenting 加工，并将抗原肽呈递给特异性T淋巴细胞，是启动免疫应答的关键因素。树突 状细胞(dendriticcells，DCs)，是目前已知功能最强的专职APCs，具有诱导初次 T 免疫应答的独特功能，能有效刺激初始型T细胞(naiveceUs)增殖，在机体细 胞免疫和体液免疫调控中具有独特的地位；巨噬细胞作为宿主天然免疫防御阵 线的重要成员在先天性免疫防御和获得性免疫应答中同样起着不可忽视的作 用。 为探讨中药植物的免疫增强药理机制，本研究初步建立了以小鼠骨髓来源 DCs为靶细胞的植物化学物免疫活性筛选模型，在细胞水平初步探讨了大粒车前 fromtheseeds asiatica 子精制多糖(crude L．，PL．PS)、 polysaecharide ofPlantago fromtheseeds asiatica L。，PLP)、 大粒车前子多糖纯品(polysaccharideofPlantago glycoprotein, from TGP)、青钱柳多糖(polysaccharidesCyclocarya CPC)的免疫调节功能。在此基础上，进一步研究了大粒车前子多糖PL-PS及PLP 对小鼠骨髓来源DCs的分化、发育、成熟、迁移等方面的影响，并初步探讨了PL-PS 对同为APCs的巨噬细胞功能的影响，为车前子产品开发提供理论依据。现将本 文主要研究结果归纳如下： 胞的细胞毒性。采用倒置显微镜观察细胞形态；用MTT法检测对细胞生长的增 殖率；流式细胞仪测定细胞的早期凋亡。结果发现经各植物化学物处理后DCs 前体细胞生长良好、细胞生存率高，对DCs自iJ体细胞凋亡无明显影响，青钱柳多 糖、毛蕊花苷和异毛蕊花苷对小鼠DCs前f体细胞具有显著地促进增殖作用，提示 青钱柳多糖、毛蕊花苷和异毛蕊花苷对小鼠DCs前体细胞的影响有可能通过直接 诱导扩增及增强其细胞生物活性而发挥。实验结果发现本研究所采用的各植物 化学物均无细胞毒性，可用于后续实验，并为临床应用及食用安全提供理论依 摘要 据。 2．建立了DCs为靶细胞的植物化学物活性筛选模型。参照经典文献，结合 国际上研究现状，采用手法分离纯化小鼠骨髓细胞，联合rmGM．CSF和rmIL．4诱 导分化培养5天后，用MACS免疫磁珠法对细胞进行进一步纯化。通过采用各 种形态学方法观察细胞形态，流式细胞仪分析细胞表面分子表达对细胞进行鉴 定，结果发现该方法可以获得大量稳定的高纯度DCs，可用于后续植物化学物的 免疫活性筛选。 3．应用已建立的以DCs为靶细胞的活性筛选模型，初步探讨了PLP、CPC、 PL．PS、TGP、毛蕊花苷和异毛蕊花苷的免疫调节活性。采用倒置显微镜观察， 形态更加典型。经毛蕊花苷和异毛蕊花苷刺激24h后i与阴性对照组相比，细胞 成团数量有所增加。MTT法检测各植物化学物对Des增殖的影响，发现大部分植 物化学物在相应的浓度范围内，对DCs的生长无显著影响；毛蕊花苷和异毛蕊花 苷可促进DCs的增殖。流式细胞仪检测各植物化学物对DCs表型和吞噬功能的影 响，发现与目前公认具有免疫促进功效并已应用于肿瘤辅助治疗的香菇多糖相