微生物快速检测技术的发展现状-课件.pptVIP

微生物快速检测技术的发展现状 华粤行仪器有限公司 邹黎明 常见微生物检测项目 常规微生物项目：细菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、酵母总数、霉菌总数 致病微生物项目：沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157：H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假单胞菌等 政府检测机构为什么需要微生物快速检测？ 日益严峻的食品安全局势的需要 提高检测效率 节约人力资源成本 与国际接轨 企业为什么需要微生物快速检测？ 市场销售环节要求快速出货。尤其是一些保质期较短的产品。 减少物流的压力，尽可能减少仓存，加快资金周转。 节约人力资源成本（外资企业尤其突出） 对于运行HACCP质量保证体系的企业来说，快速检测方法尤其重要。可以快速检测原料及半成品的污染情况，以采取相应的措施控制最终产品的微生物超标情况。 快速方法势在必行 国外许多政府检测机构都在大量使用快速检测方法，尤其是ATP法、免疫法、阻抗法和显色培养基法在国外应用相当成功。 国内的许多政府检测机构也都已经在使用或正在考虑使用国外先进的快速检测技术。 从长远发展趋势来说，快速方法是微生物检测的一大方向。 常规微生物快速检测技术现状 传统计数改良法： 1、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数 2、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测。 3、纸片法：培养基固体在载体上。省去制做培养基的时间。主要用于细菌总数检测。 4、其它：如Simplate即用胶,改良MPN产品。 螺旋平板法 螺旋平板原理 螺旋平板法的优缺点 优点： 与传统方法相比，无需稀释3个梯度，每个梯度倒2个平板，节省了大量人力物力。 缺点： 检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。 需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。 滤 膜 法 滤膜法常用于可过滤样品的微生物检测。 优点：灵敏度增大，菌落无扩散情况，便于计数。 缺点：需要额外的支出购买真空泵，多联支架及一次性滤膜；如果抽滤过程空气洁净度不够，有可能造成二次污染，尤其是对菌数要求特别严格的产品，如啤酒，澄清果汁，桶装饮用水等。 皿膜法—以纸片法为代表 纸片法是目前被广泛接受的方法。国标餐具大肠菌群采用的就是纸片法。 优点：无需制备培养基，携带方便，非漫延菌落计数较方便。 缺点：不能节省检测时间。检测成本相对偏高。大肠菌群纸片存在与MPN法无法对应的问题，金黄色葡萄球菌纸片存在取样量太低的问题。目前仅细菌总数纸片有一些用户。 其它即用胶，MPN改良法 常规微生物快速检测技术现状 快速检测微生物数量的新方法： 1、ATP法：目前产品较多，如CHARM，Biotrace, …..等。 2、电化学法：Sy-Lab公司Bactrac 4300，Tempo,… 3、颜色变化：如梅里埃的Bact/Alert和Foss的MicroFoss。 4、流式细胞技术及激光扫描技术 5、其它：热量法，放射测量法 表面洁净的检测方法 微生物学法：纸片、琼脂板、棉签拭子、海绵拭子 非微生物学法（快速法）：ATP(三磷酸腺苷，蛋白质, 降解糖、NADP(辅酶II)，其它。 ATP法两大用途 LUM-T的独特优势 CHEF 熟肉制品成熟度检验 MicroQ 水中微生物污染程度检测 Cidelite 杀虫剂残留初筛 Paslite 牛奶巴氏消毒效果 Somalite 体细胞计数 SL/MRL test 抗生素残留检测（连接ROSA　imager) 基于ATP原理的用于成品检测的微生物检测系统 Charm　LUM-96 （用于UHT产品） Biotrace Celsis（主要用于化妆品） Millipore公司的MicroScan Celsis和LUM-96 ATP法检测成品的优缺点 优点：LUM-96通常用于进行商业无菌检测。可大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。 缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的清洗保养要求特别高。另外，客户通常怀疑假阴性的可能，特别是用ATP单个检测代替常规微生物和致病微生物检测，其风险是一定存在的。(如保温增菌时间不够，菌数未达到一定数量，取样量太小，由于培养基原因，目标致病菌未大量增菌等原因) Millipore公司最新推出的MicroStar MicroStar的原理及局限性 MicroStar快速微生物检测系统是结合了生物荧光、膜过滤及CCD荧光照相检测等技术的新型检测系统. 可过滤样品经膜过滤后，将菌截留在特殊的滤膜上，滤膜放置在培养基表面增菌后取出，加ATP释放剂，然后加荧光素和荧光素酶，显示的荧光信号在荧光显微镜或荧光检测器下观察并计数。 MicroStar的优缺点 优点：缩短培养时间，提高灵敏度。适合于菌数较低的可过滤产品使用。 缺点：仪器较昂贵，运行成本也非常贵。不能用于检测未知的可能菌数较