一种基于手动芯片点样仪的快捷高效的转基因植物PCR-dot-blot鉴定法.pdfVIP

首都师范大学学报(自然科学版) 第28卷 第6期 Journal of Capital Normal University No．6 2007年12月 (Natural Science Edition) Dec．，2007 一 种基于手动芯片点样仪的快捷高效的转基因植物 PCR．dot．blot鉴定法* 汪 星 马 峰 印莉萍 黄勤妮 祁晓廷 (首都师范大学生命科学学院，北京 100037) 摘 要 本论文报道一种快捷高效的PCR—dot—blot新方法．该方法利用手动芯片点样仪将微量PCR产物(约100 Pg DNA) 点样，并采用No~．2 South。Biotin Random Prime DNA Labeling and Detection Kit(PIERCE)完成快速斑点杂交．通过鉴定 转基因烟草证明这种方法是可行而有效的．这种新方法节省材料，效率极高，特别适合大批量鉴定转基因植物． 关键词：手动芯片点样仪，斑点杂交，转基因植物． 中图分类号：Q 78 当前检测转基因植物的权威方法是分子杂交， 在提高操作效率和可重复性．首先对转基因烟草用 其中Southern、Northern、Western杂交分别从整合、转 外源目的基因特异性引物进行常规 PCR鉴定，然后 录、翻译水平检测外源基因的行为，虽然说服力强， 将该PCR产物回收纯化除去引物后，将仅为6 nL的 但是操作繁琐，费用较高，只适用于随机取样检 PCR产物(约100 Pg DNA)经变性后用手动芯片点样 测 ．如果用于批量检测，传统做法将会进一步显露 仪点于尼龙膜上，与生物素标记的外源目的基因片 出效率偏低、重复性差等缺点． 段进行斑点杂交，用很少的材料在短时间内就得到 为建立高速度、高通量的检测方法，近年来发展 了比传统方法更为理想的杂交结果．采用本方法可 了生物芯片技术，即将大量DNA或蛋白质等以预先 以对转基因植株进行批量检测，材料用量少、操作简 设计的方式固定在载体上形成高密度阵列，利用核 单快捷、结果可信度高，与其它方法相比具有明显的 酸分子杂交、蛋白分子亲和原理对样品进行批量检 优势． 测 ．该技术以其高效、快速的优势，有力地推动了 1 材料和方法 后基类组时代医学及分子生物学各个领域的研究工 作b“ ．随着该项技术的普及，许多研究者希望能够 1．1 植物材料和试剂 用更简单的设备方便地制备个性化的芯片，以便更 1．1．1 转基因烟草 加灵活地为科研服务．手动芯片点样仪(manual 用叶盘法将水稻的基因 OSsec27p(GenBank microarrayer)可以很好地满足这一需求，这类产品价 Accession no．DQ434847)转人烟草(Nicotiana tabacum 格实惠、操作简单、重复性好，可以用来制作高质量 L．CV．W38)，所得Tn代植株在 16 h光照(25℃)／8 h 的基因或蛋白芯片 并且已经得到许多成功的结 黑暗条件下培养． 果，但在鉴定转基因植物方面尚未见报道． 1．2 方法 本论文报道了一种基于手动芯片点样仪的快 1．2．1 转基因植物的PCR鉴定 速、批量鉴定转基因植物的PCR．dot．blot新方法，旨 随机挑取六株Tn代转基因烟草，采用植物基因