转禽冠状病毒免疫原基因马铃薯及其对小鼠的免疫原性.pdfVIP

生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报 ISSN ACTA BIOCHIMICA et BIOPHYSICA SINICA 2003 , 35 ( 11) : 1011 - 1015 CN 311300/ Q 转禽冠状病毒免疫原基因马铃薯 及其对小鼠的免疫原性 吴建祥1 , 2 　周继勇1 　周雪平2 ( 1 浙江大学动物预防医学研究所 , 杭州 310029 ; 2 浙江大学生物技术研究所 , 杭州 310029 ) ( ) 摘要　　为了探索禽冠状病毒免疫原基因在植物中表达的可行性 , 将传染性支气管炎病毒 IBV ZJ971 毒株 S1 基因 定向克隆到pBI121 质粒的 35 S 启动子下游。用三亲交配法将重组质粒导入 EHA105 根癌农杆菌 , 建立了一种由农 杆菌介导的马铃薯转化体系 , 其愈伤形成率达 100 % , 芽的分化率达 95 % 。经 PCR 和 Southern 印迹检测证明 , IBV S1 基因已整合到植物基因组内 , 获 47 株转基因植株。Northern 印迹和 EL ISA 分析表明 , 转基因植株中 IBV S1 基因 能正常转录和翻译。转基因马铃薯的BALB/ C 小鼠免疫试验结果表明 , 0. 5 g 和 1 g 剂量转基因马铃薯免疫小鼠 , 21 天后的抗体 EL ISA 效价分别达 120∶～140∶和 1801∶160∶ , 中和抗体效价分别达 1165∶～1562∶ 和 1330∶～12048∶ , 说明禽冠状 病毒免疫原基因的转基因马铃薯表达产物具有免疫原性。 关键词　　禽 ; 冠状病毒 ; 免疫原基因 ; 转基因马铃薯 ; 免疫原性 ( ) 　　传染性支气管炎 infectious bronchitis , IB 是由禽 为了开发新型、安全、有效的禽冠状病毒基因工 ( 冠状病毒———传染性支气管炎病毒 infectious bron 程疫苗 , 我们进行了转基因马铃薯表达 IBV 免疫原 chitis virus , IBV) 引起的一种急性高度接触性传染病。 基因及其表达产物对小鼠免疫原性的研究。 该病每年都会对养禽业造成巨大的经济损失。自从 1931 年由 Schalk 和 Hawn 在美国报道以来[1 ] , 迄今 ( ) 1 　材料和方法 Materials and Methods 已分离的毒株有数十株之多[2 ] , 已知血清型达20 多 1. 1 　材料 种。传染性支气管炎目前无特效的治疗方法 , 主要使 1. 1. 1 　菌株和质粒 　　大肠杆菌 DH5α, 根癌农杆 用 IBV 灭活苗和弱毒苗预防接种。由于 IBV 灭活苗 菌 EHA105 , 植物表达载体 pBI121 , 含辅助质粒 和弱毒苗均存在缺陷 , 因此开发安全、有效的新型疫 pRK2103 的 HB101 和含 IBVZJ971 S1 基因的pBS 质 苗对 IB 的控制具有重要意义。自 1983 年首次报道植 粒由本实验室保存[2 ] 。 物的遗传转化以来[3 ] , 该项技术在合成有医疗价值 1. 1. 2 　酶和生化试剂 　　各种限制性内切酶、T4 的多肽、蛋白质, 包括抗原、抗体、生物活性物质方 DNA 连接酶和 Taq