甘蓝组织培养再生、转化及筛选系统的优化研究.pdfVIP

甘蓝组织培养再生、转化及筛选系统的优化研究 摘要 本实验选材为十字花科植物甘蓝，在建立起再生系统后，分别以下胚轴 和子叶为试验材料，所用基本培养基为Ms培养基，研究了不同外源激素配比 以及不同培养条件对器官分化的影响，选出适合甘蓝生长分化的最佳培养基 O．2 和培养条件。结果表明：甘蓝下胚轴诱导愈伤组织的最佳培养基为NAA 0．5 0．1 mg／L，2，4-Dmg／L；子叶诱导愈伤组织的最佳培养基为NAA mg／L， 2，4-D0．5 2 0．1 mg／L；愈伤组织诱导芽分化的最佳培养基为6-BAmg／L，NAA MS+IqAA AgNO，，可提高分化率；根的诱导用的培养基为1／2 mg／L，附加20 pm O．1mg／L． 在转化过程中，进行了几种比较试验，包括卡那霉素的筛选、抗生素浓 度的筛选及不同防褐剂、不同菌浓度、共培养天数、衣杆菌的不同感染时间 对转化苗的影响。结果表明：AgN03对甘蓝外植体的褐变有一定的防止作用， 甘蓝外植体对卡那霉素的敏感闽值为25mg／L，转化开始阶段不加卡那霉素， 但在试验过程中要逐渐提高Km的浓度．附加的羧苄青霉素在500mg／L时能 完全抑制农杆菌的生长，但转化苗会逐渐产生抗性，所以在试验过程中也要 逐步筛选羧苄青霉素的浓度。最后得到甘蓝抗Km的优化组合。 关键词甘蓝根癌农杆菌 Bcka优化组合 日U 吾 甘蓝(Brassicaoleracea三．)又称结球甘蓝、包心菜、洋白菜、圆白菜、 茴予白、椰菜等，是十字花科芸薹属甘蓝种形成叶球的一个变种，二年生草 本植物川。 甘蓝起源于地中海至北海沿岸，由不结球野生甘蓝演化而来，甘蓝栽培 历史久远，早在4000年前野生甘蓝的某些类型就被古罗马和希腊人所利用， 16～18世纪传入亚洲，后传遍世界各地。并经多年的选育，逐渐演化出结球 甘蓝、羽衣甘蓝、抱子甘蓝、花椰菜等变种，到19世纪40年代甘蓝已在我 国许多地区广为栽培。 由于甘蓝具有适应性广，抗逆性较强，栽培技术简单，产量高，品质优 及耐贮藏运输等优良特性，加上营养价值高，食用方法多。因此世界各国广 为栽培，是世界十大蔬菜之一，在蔬菜生产和周年供应中占有重要地位121。 甘蓝在我国栽培历史较短，但发展普及十分迅速，目前全国各地均有栽 培，多数地区选用适宜的品种实行排开播种、分期收获的栽培方式Il】。结球 甘蓝按植物学分类可分为普通甘蓝、紫甘蓝、和皱叶甘蓝3个变种。根据叶 球形状分为尖头型、圆头型和平头型。依栽培季节可分为春甘蓝、夏甘蓝、 秋冬甘蓝和一年一熟甘蓝。我国已实现了甘蓝的四季栽培。总之，甘蓝在我 国南北方蔬菜全年供应中占有重要的地位。 甘蓝的营养丰富，据分析，每100克含蛋白质1．1克，脂肪0．2克，碳水 化合物3．4克，含钙32毫克，磷24毫克，铁0．3克，还含有胡萝h素O．02 毫克，维生素C38毫克，甘蓝的维生素C在蔬菜中位居前列，因此，在古 代曾用甘蓝作药物治疗各种疾病【2J。甘蓝很耐贮藏，产量很高，食用期达半 年以1-_，甘蓝在我国蔬菜生产中占有重要的一席之地。 1．组织培养研究进展 culture)是指无菌条件下将离体的植物器官(如根、 所谓组织培养(tissue 茎、叶等)、组织(如形成层、胚乳、髓部等)、细胞(如大孢子、小孢子、 ．2一 体细胞等)，以及原生质体和花药，在人工控制的培养基上培养，使其生长、 分化并形成完整植株的技术和方法。在植物激素的影响下，外植体经过细胞 官、直至最终形成完整植株的过程。通常，愈伤组织再分