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人视网膜色素上皮细胞吞噬动力学及吞噬过程中camp浓度的变化毕业论文
室温下,于暗处用终浓度为10ug/ml的FITC液孵育以蔗糖密
度梯度法提取的ROS1小时,然后以细胞培养液调整浓度为1×
107rnl~。
4.乳胶微球的制备
7
以细胞培养液调整浓度至lX10ml~。
5.吞噬动力学观察
7ml。的FITC—ROS或
向每个培养孔(6孔板)中加入1×10
血清DMEM冲洗二次,以终止吞噬。采用双重荧光标记法,于上
述相应的实验时间点,在荧光显微镜下以非选择性滤光片动态观
察HRPE细胞的吞噬过程。
6.扫描及透射电镜
经与ROS或LB孵育6h后,加入2.5%的戊二醛固定,备电镜
观察。
7.细胞内cAMP浓度的检测
7 rnl“的ROS或LB
实验组每个培养孔(24孔板)中加入1×10
悬液lml,对照组加入培养液lml/孑L进行孵育,终止吞噬的时间及
方法同上。向终止反应后的HRPE细胞中加入无血清DMEM液
清液100ul备125I—cAMP放射免疫检测。
8.统计学分析结果
每个实验点至少重复3次,计算均值±标准差(叉±s)。用
Student’s
t检验,比较实验组与对照组数值,P0.05为统计学上
有明显差异的标准。
结 果
一、HRPE细胞吞噬动力学检测结果:
·2·
1.特异性吞隧:
时可见极少数的ROS被HRPE细胞摄入细胞内,之后的孵甯过稷
孛HRPE缨戆结合及吞噬静ROS数器不驽臻魏,至孵育18h鞠
24h,HRPE细胞对ROS的结合及吞噬分别达到饱程。
2.菲特异性褥噬:
孵育至l。5h结合痿动,6h摄入舞始,在戏察酶48h内+HRPE
细胞结合及脊噬的LB数目随时间延长而星线性增加。
测结果:
i.特舅性吞噬:
浓度无差异(P0。05),48hcAMP浓度值路有麟丹。
2.菲祷弹性吞噬:
麓异(P0.05),12h—q8hcAMP浓度较对照组降低(P0.05)。
缕 论
1,HRPE细胞特异性吞噬过程中结合及吞人的启动早于非特
舞缝吞噬。
2。HRPE细胞特异性吞噬的结合及器人均具有馋;}薅性,j}特
辩性吞噬无饱和性。
3+cAMP对HP,_PE缁胞特异缝吞噬器人过翟的维持致关鲞
蒙,但不参与非特搏性吞噬的煎接调节。
4.HRPE麓特异往吞噬过程伴髓着cAMP浓度斡降低。
关键谣:视网膜色素上皮细胞;器噬;环腺营一磷酸
-气.
Thekineticsalterationof adenosine
and cylic monophosphate
hmnan ceHs
inthe of
phagocyticprocess pigmentepithelium
ABSTRACT
Objective
human
The ructionof retinal
phagocytic pigmentepitheliumis
for thevision.Thefailureofthis
iscrucial
(HRPE)cells sustaining
willle
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