人视网膜色素上皮细胞吞噬动力学及吞噬过程中camp浓度的变化.pdfVIP

室温下，于暗处用终浓度为10ug／ml的FITC液孵育以蔗糖密 度梯度法提取的ROS1小时，然后以细胞培养液调整浓度为1× 107rnl～。 4．乳胶微球的制备 7 以细胞培养液调整浓度至lX10ml～。 5．吞噬动力学观察 7ml。的FITC—ROS或 向每个培养孔(6孔板)中加入1×10 血清DMEM冲洗二次，以终止吞噬。采用双重荧光标记法，于上 述相应的实验时间点，在荧光显微镜下以非选择性滤光片动态观 察HRPE细胞的吞噬过程。 6．扫描及透射电镜 经与ROS或LB孵育6h后，加入2．5％的戊二醛固定，备电镜 观察。 7．细胞内cAMP浓度的检测 7 rnl“的ROS或LB 实验组每个培养孔(24孔板)中加入1×10 悬液lml，对照组加入培养液lml／孑L进行孵育，终止吞噬的时间及 方法同上。向终止反应后的HRPE细胞中加入无血清DMEM液 清液100ul备125I—cAMP放射免疫检测。 8．统计学分析结果 每个实验点至少重复3次，计算均值±标准差(叉±s)。用 Student’s t检验，比较实验组与对照组数值，P0．05为统计学上 有明显差异的标准。 结 果 一、HRPE细胞吞噬动力学检测结果： ·2· 1．特异性吞隧： 时可见极少数的ROS被HRPE细胞摄入细胞内，之后的孵甯过稷 孛HRPE缨戆结合及吞噬静ROS数器不驽臻魏，至孵育18h鞠 24h，HRPE细胞对ROS的结合及吞噬分别达到饱程。 2．菲特异性褥噬： 孵育至l。5h结合痿动，6h摄入舞始，在戏察酶48h内+HRPE 细胞结合及脊噬的LB数目随时间延长而星线性增加。 测结果： i．特舅性吞噬： 浓度无差异(P0。05)，48hcAMP浓度值路有麟丹。 2．菲祷弹性吞噬： 麓异(P0．05)，12h—q8hcAMP浓度较对照组降低(P0．05)。 缕 论 1，HRPE细胞特异性吞噬过程中结合及吞人的启动早于非特 舞缝吞噬。 2。HRPE细胞特异性吞噬的结合及器人均具有馋；}薅性，j}特 辩性吞噬无饱和性。 3+cAMP对HP,_PE缁胞特异缝吞噬器人过翟的维持致关鲞 蒙，但不参与非特搏性吞噬的煎接调节。 4．HRPE麓特异往吞噬过程伴髓着cAMP浓度斡降低。 关键谣：视网膜色素上皮细胞；器噬；环腺营一磷酸 -气． Thekineticsalterationof adenosine and cylic monophosphate hmnan ceHs inthe of phagocyticprocess pigmentepithelium ABSTRACT Objective human The ructionof retinal phagocytic pigmentepitheliumis for thevision．Thefailureofthis iscrucial (HRPE)cells sustaining willle