涎腺腺样囊性癌基因治疗的实验研究.pdfVIP

中文摘要 为空病毒组，每瘤注射空病毒(EGFP)5×108PFU。C组为 5×1 HSV-tk组，每瘤注射tk 08PFU。D组为联合基因治疗组， 每瘤注射tk(5×108PFU)+IL一2(5×1 08PFU)．。48小时以 后，对B、C、D组裸鼠每日腹腔注射GCV，1 Oomg／kg／日， 2次／日，连续1O天。A组每日腹腔注射等量生理盐水。观察 裸鼠肿瘤生长情况。在实验开始的第1O天、第13天、第 16天、第1 9天每3天测量肿瘤长、宽、高，并以V=(6／Ⅱ) 长度×宽度×高度(长宽之间必成直角)计算肿瘤体积。 (3)标本采集与检测：实验第20天断颈处死裸鼠后，剥离 瘤体，取移植瘤组织称重，比较4组间移植瘤体积变化， OO％，应用 以公式抑瘤率=(1一实验组体重／对照组体重)×l 流式细胞仪检测4组的凋亡率及细胞周期的分布。移植瘤组 织常规固定、包埋，制作病理切片，HE染色观察组织学变 化。并透射电镜观察细胞的超微结构。 结果：1．A、B、C、D组裸鼠第20日时肿瘤质量均数分别为 8士O．44，1．94士O．32，O．91士O．28，O．52士O．11； (以g为单位)：2．1 以瘤重为依据，C、D组抑瘤率分别为76％和91％。 967．61士349．28， A、B、C、D组体积均数为(以mm3为单位)：1 l土18 5．1 1765．3l士260．84，889．81．90，258土40．29。C、D组裸 鼠肿瘤生长明显受到抑制，经统计学检验，除A、B组无明显 1)。2．形态学观察： C、D组比较均有显著性差异(PO．O (1)肉眼观察：肿瘤椭圆形，结节状，有包膜，表面光滑， 个别瘤体表面有破溃。剖面实性，灰白色，部分区域由黄白 色豆渣样物，似坏死组织。(2)光镜观察：肿瘤片状排列， 细胞呈圆形或多边形，胞浆红染。胞核圆形，居中，核大而 中文摘要 深染，核浆比例增大，异型性明显，核分裂像易见。C、D 实验组中可见成片的凋亡细胞，细胞体积缩小，胞浆固缩， 可见凋亡小体。A、B组瘤细胞成片生长，偶见凋亡细胞。(3) 透射电镜：C、D实验组均可见大量的凋亡细胞：细胞皱缩， 胞体、胞核体积缩小，染色质浓缩，电子密度增加，呈新月 状边集于核膜下。A、B组瘤细胞圆形，核畸形，有个别凋亡 细胞。3．流式细胞分析术检测4组均有特征性的凋亡峰出现。 (1)凋亡率：对照组凋亡率为8．34士O．4l％，空病毒组凋亡率 O．07士O．3 3．53士O．3 为1 1，TK组凋亡率为1 2，联合基因治疗组 凋亡率为3O．55士O’．23。除对照组与空病毒组无显著差异外， 其余组间两两比较均有显著性差异(PO．01)。(2．)细胞周期： S期细胞百分率 A组Go／Gl期细胞百分率54．7土1．79％， 17．59土O．46％，G2M期细胞百分率28．2l士1．63％；B组Go／Gl期 细胞百分率53．66士1．18％，S期细胞百分率17．7l士O．58％，G2M 1．95士1．63％，S 分率16．28士1．36％；D组Go／Gl期细胞百分率5 期细胞百分率29．40士O．68％，G2肌期细胞百分率 14．46士1．49％。Go／Gl期细胞百分率各组间无明显差异(P O．05)。C、D组S期比例明显增加，A、B间无显著差异，C、 (PO．O 1)