蜈蚣多糖对Hela细胞的增殖抑制作用研究论文.docVIP

　　蜈蚣多糖对Hela细胞的增殖抑制作用研究论文 李兴暖 韩雅莉 余卫国 【摘要】 目的研究蜈蚣多糖对人宫颈癌细胞Hela细胞的抑制作用及作用机制。方法用MTT法检测蜈蚣多糖对Hela细胞生长的抑制作用；流式细胞仪和Annexin V-FITC/PI双荧光染色分别检测蜈蚣多糖对Hela细胞周期及凋亡情况的影响。结果在一定浓度范围内蜈蚣多糖可显著抑制Hela细胞的增殖，改变Hela细胞的细胞周期，使细胞阻滞于G2/M期，并能诱导细胞凋亡。结论蜈蚣多糖可能通过改变Hela细胞的细胞周期，诱导细胞凋亡，从而对Hela细胞的增殖有一定的抑制作用。 【关键词】 蜈蚣多糖；细胞周期；细胞凋亡 Abstract:ObjectiveTo investigate the inhibitory effects of polysaccharide from Scolopendra subspinipes mutilans (PSSM) on Hela cells and its mechanism. MethodsMTT assay etry and AnnexinV-FITC/PI fluorescence staining.ResultsPSSM could obviously inhibit the proliferation of Hela cells at specific concentration range, change the cell cycle of Hela cells and block Hela cells at G2/M phase, and induce cell apoptosis.ConclusionPSSM can inhibit the gro Scolopendra subspinipes mutilans; Cell cycle; Cell apoptosis 少棘蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L. Koch又名百足, 属节肢动物门，多足纲，唇足目.freelutilans L. Koch购自汕头市恒青药店，由广东工业大学生药研究室对其进行种类鉴定。人宫颈癌Hela细胞，由汕头大学医学院分子病理实验室提供，微血管内皮细胞MVEC，由汕头大学多学科研究中心提供。 1.2 试剂与仪器 DEAE-52为 TT）、碘化丙啶（PI）均购自Sigma公司；Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自北京宝赛生物技术有限公司；新生牛血清购自杭州四季青生物有限公司。Thermo Labsystems酶标仪（Thermo公司）；Shel Lab二氧化碳培养箱； EpicsXL 流式细胞仪（Backman Coulter公司）；倒置显微镜、荧光显微镜（Olympus公司）；Nikon Coolpix 4500数码相机。 2 方法 2.1 蜈蚣多糖(polysaccharides from Scolopendra subspinipes mutilans L. Koch, SSP)的制备少棘蜈蚣87 g 研钵磨碎，加入1 000 ml蒸馏水90℃恒温水浴搅拌4 h，过滤，残渣加入500 ml蒸馏水，重复上述步骤，过滤，合并滤液，浓缩滤液。取上清液，加5倍体积95％乙醇4℃静置过夜，离心，去上清液，沉淀用少许蒸馏水溶解。Sevag法去蛋白数次［4］，将去蛋白溶液透析干燥，过DEAE-52离子交换纤维素色谱柱，以0.05，0.1，0.2，0.4和1 mol·L-1 NaCl 进行阶段洗脱，共得到3个糖峰，其中浓度0.05 mol·L-1的NaCl洗脱峰糖含量最高，收集此组分透析干燥，待用。 2.2 Hela和人微血管内皮细胞 ( Human microvascular endothelial cell,MVEC) 的培养取对数生长期的Hela和MVEC细胞接种于含10％小牛血清的1640培养基中，接种浓度为5×105 个/ml，置37℃，5％CO2 浓度，饱和湿度的二氧化碳培养箱中培养24 h。去原培养基，加入含有SSP浓度分别为0，0.5，1，1.5，2，4 μg/ml的维持液（含1.5％小牛血清的1640培养基），置培养箱中继续培养24 h和48 h后进行实验。 2.3 蜈蚣多糖（SSP）对Hela细胞增殖的影响取对数生长期Hela细胞按上述方法接种于96孔板中，贴壁培养24 h，去原培养基，加入含有0.5，1，1.5，2，4 μg/ml SSP维持液，总体积为200 μl，分别培养24，48 h后取出，每孔加入MTT 20 μl继续孵育4 h，吸去上清，加入200 μl二甲基亚砜，振荡15 min，酶标仪检测570 nm波长下各孔吸光值（A），按下列公