园林植物育种学——生物技术在园林植物遗传改良中的应用.docVIP

第九章 生物技术在园林植物遗传改良中的应用 本章教学目的和要求 1 ．了解园林植物生物技术研究的主要内容。 2 ．掌握植物组织培养、基因工程等技术在园林植物遗传育种中的应用。 本章教学重点和难点 重点：组织培养与基因工程在园林植物遗传育种中的作用。 难点：园林植物生物技术的原理与操作方法。 教学内容： 生物技术（ biotechnology ）是指按照人们的意愿采取一定的技术手段，直接或间接地利用生物有机体（从微生物直至高等动植物）或其组成部分（器官、组织、细胞等），发展新的生产工艺，创造新的生物品种或生物制品的一种科学技术体系。 包括组织培养、细胞工程、基因工程、发酵工程、蛋白质工程等。 ? ? 第一节 植物组织培养 一、植物组织培养的相关概念 植物组织培养（ plant tissue culture ）：在无菌条件下，将离体的植物材料培养于人工培养基上，并给以适宜的培养条件，使之形成完整植株或生产出具有一定经济价值的生物产品的技术。 包括分生组织、输导组织、薄壁组织等离体组织，根、茎、叶、花、果实等各种器官，细胞、胚、胚珠、子房、胚乳等的离体培养。 外植体（ explant ）： 用于培养的离体材料。 继代培养（ subculture ）： 由最初培养新增殖的组织，继续转入新的培养基上培养的过程。 无性繁殖系： 由同一外植体反复进行继代培养后，所得到的一系列无性繁殖后代。 单细胞无性系： 在细胞培养中，由单细胞形成的无性系。 愈伤组织（ callus ）： 在培养过程中，从植物各种器官、组织的外植体增殖而形成的一种无特定结构和功能的细胞团。 胚状体（ embryoid ）： 由外植体或愈伤组织产生的，与正常受精卵发育方式类似的胚胎结构体。 二、植物组织培养的基本程序 1 ．培养用具的准备 2 ．培养基的制备 基本成分（大量元素、微量元素、有机成分、铁盐）、碳源（蔗糖、葡萄糖等）、凝固剂（琼脂、卡拉胶等）、植物生长调节剂（生长素、细胞分裂素等）、其他附加成分（活性炭、 LH 、 CH 、椰乳等）、 pH 值 3 ．外植体的选择 4 ．接种（无菌操作） 5 ．离体培养 初代培养、继代培养 愈伤组织诱导、不定芽分化（体胚再生）、增殖培养、生根培养等 培养条件、培养方式 6 ．炼苗移栽 三、植物组织培养的内容 1 ．植株培养 2 ．茎尖与分生组织培养 3 ．胚培养（ embryo culture ） 4 ．离体器官培养（ organ culture ） 5 ．花药与花粉培养（ anther pollen ） 6 ．胚珠和子房培养（ ovule ovary ） 7 ．胚乳培养（ endosperm culture ） 8 ．细胞培养（ cell culture ） 9 ．离体授粉受精（ in vitro fertilization ） 四、植物组织培养在园林植物育种中的应用 ?? 快速繁殖植物品种、珍稀植物 ?? 脱除病毒，培养无病毒苗木 ?? 进行种质资源的长期保存和远距离运输 ?? 离体诱发和筛选突变体 离体辐射或化学诱变；体细胞无性系变异的选择 ?? 获得倍性不同的植株 花药（粉）培养获得单倍体；胚乳培养获得三倍体 ?? 克服种子发育和萌发中的障碍 兰花种子萌发；胚抢救等 ?? 克服远缘杂交困难 离体授粉受精 ?? 提供育种中间材料 ? 第二节 植物原生质体培养与细胞融合 一、概念 原生质体：被去掉细胞壁的具有生活力的裸露细胞。 原生质体培养：将去掉了细胞壁的裸露细胞培养成植株的技术。 原生质体融合（细胞融合、体细胞杂交）：将不同种、甚至属间细胞人工融合为杂种细胞，并使其再生成植株的技术。 二、原生质体培养与细胞融合的方法步骤 1 ．原生质体的制备 获得大量有活力的原生质体。 ?? 原生质体的分离 机械分离法 酶解分离法：分离材料的准备（离体叶片、悬浮细胞等） 酶解（果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶等） ? 2 ）原生质体的收集与纯化 过滤－离心法（沉淀法） 漂浮法 界面法 3 ）原生质体的活力测定：形态、活性染色、荧光染料活性染色等方法 影响原生质体活力的因素： ?? 分离材料的生理状态 ?? 酶解条件：酶质量、浓度、酶解温度、酶解时间、酶溶液的渗透压 ? ?? 分离条件：离心次数、离心速度、纯化方法、分离持续时间 ? ?? 环境条件：操作环境的温度、分离用具的影响 2 ．原生质体的培养 培养原生质体的基本营养同一般组培；对某些组分，如钙和碳源的水平要求更为严格。在培养基中保持一定的渗透压极为重要。 常用的培养基有： MS 培养基、 N-T 培养基、 B5 培养基等。