液氮冷冻构建兔股骨头缺损坏死的实验研究.doc

应用软骨下钻孔结合液氮冷冻制作兔股骨头缺损坏死模型 李海冰，瞿向阳，李 明，罗 聪，魏光辉 （400014 重庆，重庆医科大学附属儿童医院骨科，儿童发育疾病研究教育部重点实验室，儿科学重庆市重点实验室，重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地） [摘要] 目的 通过液氮冷冻在兔股骨头缺损的基础上造成坏死，为股骨头缺血坏死的治疗研究建立动物模型。方法 22只健康成年新西兰大白兔建立单侧股骨头缺损模型，并用液氮从骨缺损内将股骨头冷冻坏死，术后定期行股骨头X线检查、大体标本观察、组织切片及墨汁灌注染色了解股骨头坏死及修复情况。结果 液氮冷冻构建兔股骨头坏死缺损股骨头X线、大体标本、组织学形态及墨汁灌注染色不同阶段均出现明显变化。结论 液氮冷冻建立的兔股骨头缺损坏死可以作为模拟临床手术刮出死骨，植骨治疗研究的动物模型。 [关键词] 股骨头坏死；骨缺损；液氮冷冻；动物模型；兔 [中国法分类号] R683.41 [文献标志码] A [通信作者] 瞿向阳， E-mail：drqxy04090@126.com [基金项目] 重庆市科委计划项目（cstc2009BB5359）国家临床重点专科项目（2014） 股骨头缺血性坏死是一种发生于髋关节的棘手疾病，好发于30～50岁青壮年，近年来其发病率呈上升趋势，其病因涉及多种因素［1］，发病机制尚未明了，病理过程复杂，治疗方法多种多样［2-3］，但均不能终止或者逆转已发生股骨头坏死的病理过程，最终股骨头塌陷需行全髋关节置换［4］。建立能够复制人股骨头缺血性坏死的动物模型，对了解股骨头缺血性坏死的发生、发展及预后有重要意义。目前股骨头缺血性坏死动物模型大多数只能模拟股骨头缺血坏死的早期病理变化，很少能制作出股骨头坏死伴关节面塌陷。本实验总结已有研究成功经验并进行改进，采用液氮在股骨头缺损的基础上冷冻，成功诱导出股骨头坏死伴关节面塌陷，为探索股骨头缺血性坏死治疗，特别是为Ficat分期Ⅰ、Ⅱ髓芯减压和（或）股骨头头颈交界处开窗刮出死骨后植骨治疗提供较好的动物模型。 1 资料与方法 1.1 实验动物 健康成年新西兰大白兔22只，雌雄不拘，体质量（2.25±0.23）kg，由重庆医科大学试验动物中心提供。 1.2 方法 动物术前首先采用3％戊巴比妥纳，按30 mg/kg自耳缘静脉麻醉动物，麻醉显效后，取仰卧位固定于手术台上，剪毛、脱毛后常规消毒铺巾，取右下肢髋关节外侧横形切口长3～5 cm，切开皮肤、皮下组织、深筋膜，分离肌肉，部分切断附着于大粗隆上的肌肉，暴露大转子，顺大转子前内侧分离直达髋关节囊，打开髋关节囊，暴露股骨头，在软骨与骨的交界处，用电钻以直径3.5 mm钻头向股骨头前内侧钻孔,深度约4 mm，然后用mini刮匙向内侧潜行刮除松质骨至软骨下骨，约占股骨头总体积的30%～40%，模拟骨坏死行病灶清理术，充分保护周围软组织，用空针穿入股骨头钻孔处，将液氮注射到股骨头局部冷冻1次［5］，维持1min，冷冻后生理盐水复温，逐层缝合切口。实验动物均单侧手术，对侧作为自身对照。术后将动物单独置于兔笼中，肌注青霉素预防感染。 1.3 观察方式 1.3.1 全身情况观察 观察术后实验动物的一般情况，如饮食、精神状态、运动、毛发、有无伤口感染等。 1.3.2 X线片观察 术后1、2、4、6、8周行X线片检查，观察股骨头的密度变化，观察股骨头外形密度及小梁变化。 1.3.3 股骨头大体标本观察 术后1、2、4、6、8周各处死3只，大体观察股骨头外观。 1.3.4 股骨头标本的制作和观察 处死实验动物，常规行HE染色及甲苯胺蓝染色，光镜下观察股骨头骨膜、软骨、骨组织、骨小梁及骨髓组织。 1.3.5 血管墨汁灌注染色 术后2、4、8周各2只，麻醉后行墨汁灌注。厚切片（25 μm）观察股骨头血管分布和生长情况，所有标本切片取5个低倍视野，对微血管数进行计数。 1.4 统计学处理 数据以±s表示，采用SPSS 12．0统计软件行t检验。2 结果 2.1 动物一般情况 术后1周内，实验动物右下肢轻度跛行，饮食精神欠佳，运动量明显减少，毛发少紊乱。后逐渐恢复，2周后实验动物回复术前状态，大部分伤口I期愈合，其中2例出现伤口感染，经换药后有效控制,1例术后7 d行X线片检查发现股骨颈骨折而退出实验。 2.2 股骨头X线检查 造模后1周，股骨头缺损清晰，外形圆，软骨下骨无塌陷，骨密度无明显变化，骨小梁结构基本正常。术后2周，股骨头缺损仍可见，但较前略缩小，软骨下骨开始出现塌陷，股骨颈开始变粗短。术后4周，股骨头缺损塌陷，股骨头失去正常圆的形态，变得扁平，骨小梁结构出现紊乱。术后6周，股骨头形态不规则，呈椭圆形，软骨下骨塌陷，骨密度下降，骨小梁结构紊乱。术后8周，股骨头