水产微生物—病毒和亚病毒.docVIP

病毒和亚病毒 病毒（virus）是指一类超显微结构、非细胞形态、专性活细胞内寄生的微生物。 1892年及1898年，Ivanovski与Beijerinck分别独立研究了烟草花叶病的病原后，证实其病原体为一种能通过细菌滤器的“传染性活性液体”或称“病毒”，从而揭开了病毒学的历史。随后，人们陆续发现各种植物病毒、动物病毒、微生物病毒及亚病毒，并对病毒粒子进行了电镜观察和化学分析。自20世纪50年代始，又展开了病毒的分子生物学研究，从而使人类对病毒本质及其与宿主间的相互作用的认识，不断深入。 病毒具有以下特点：形体极其微小，一般可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察其大小与形态；不具细胞结构，又称分子生物；其主要成分为核酸和蛋白质，每一种病毒仅含一种核酸（DNA或RNA）；既无产能酶系，也无蛋白质合成系统，在宿主的活细胞内营专性寄生，依靠宿主细胞，通过核酸复制和核酸蛋白装配的形式进行增殖；在离体条件下，能以无生命的化学大分子状态存在，并保持其感染性；对一般抗生素不敏感，但对干扰素敏感。 病毒学研究的基本方法 同微生物学其他分支学科一样，病毒学的进步完全得益于研究方法和技术手段的发展。 一、病毒的分离与纯化 通过病毒的分离与纯化获得纯化的、有感染性的病毒制备物是病毒学研究和实践的基本技术。 1．病毒的分离 病毒的分离是将疑有病毒而待分离的标本（如微生物发酵的倒罐液，可疑病毒感染患者的体液、血液、粪便等临床标本）经处理后，接种于敏感的实验宿主、鸡胚或细胞培养，经过一段时间孵育后，通过检查病毒特异性病理表现或用其它方法来肯定病毒的存在。 2．病毒的纯化 由于病毒只能在活细胞内繁殖，所以用于病毒制备的起始材料只能是病毒感染的宿主机体，组织或细胞经破碎后的抽提物，或病毒感染的宿主的体液，血液和分泌物，或病毒感染的细胞培养物的培养液等。在这些材料中不可避免地混杂有大量的组织或细胞成分、培养基成分、可能污染的其他微生物与杂质。为了得到纯净的病毒材料，必须利用一切可能的方法将这些杂质成分除去，这就是病毒的纯化。 二、病毒的鉴定 以物理、化学、生物学、乃至分子生物学方法鉴别病毒的性质，描述其特征是病毒分类的前提。另一方面、病毒鉴定是诊断病毒性疾病的可靠方法。 1．根据病毒感染的宿主范围及感染表现的鉴定 大多数病毒都有相当专一的宿主范围，因而病毒的宿主谱可以作为病毒初步鉴定的指标。病毒感染宿主机体所引起的疾病症状，在鸡胚绒毛尿囊膜上所形成的痘疱的形态，以及在单层细胞培养上所产生的致细胞病变效应表现都有一定特异性，根据病毒这些特征性的表现亦可对其进行初步的鉴定。 2．病毒的理化性质鉴定 利用电镜技术，分析超速离心技术以及热、紫外线、化学药物、脂溶剂等理化因子对病毒感染性的作用可检查毒粒的大小和形态，测定病毒及其组分的沉降系数、浮力密度和分子量，鉴定病毒的核酸类型，确定病毒对不同理的因子的敏感性。 3．血细胞凝集性质鉴定 许多病毒能吸附于一定种类的哺乳动物和禽类的红血球细胞表面产生凝集现象。不同的病毒所凝集的血细胞种类以及发生凝集所要求的温度、pH条件可能不同，这些性质给病毒鉴定提供了重要依据。 4．病毒的血清学鉴定 建立在抗原与抗体特异性反应基础上的免疫学方法是一类非常重要的病毒鉴定方法。免疫沉淀反应、凝集反应、酶联免疫吸附测定、血凝抑制试验、中和试验、免疫荧光、免疫电镜、放射免疫以及单克隆抗体等技术都广泛用于病毒鉴定工作。血清学方法所进行的病毒抗原分析可使病毒鉴定更为准确、精细，它们对于病毒的最终鉴定，乃至区分同型病毒的不同毒株，了解病毒的亲缘关系以及病毒性疾病的诊断都是至关重要的。 第二节 病毒的基本性状 一、病毒的性质 （一）病毒的大小和形态 病毒粒子极其微小，测其大小的单位通常用纳米（nm）表示。已知痘类病毒个体最大，大小约200~300nm，如经适当染色后可在光学显微镜下观察；而副流感病毒、单纯疱疹病毒等其大小约150~200nm；流行性感冒病毒、腺病毒和逆转录病毒等其大小约80~120nm；小型病毒如口蹄疫病毒、脊髓灰质炎病毒等其大小约18~30nm。 病毒粒子的形态多样，其中以球型或近似球型的最为多见；植物病毒、昆虫病毒和某些水生动物病毒（如虾类）多成杆状，但人和动物的某些病毒也呈丝状，如初分离时的流感病毒；弹状病毒为一端圆钝的杆状，形似子弹头而得名，如狂犬病病毒；砖形为痘类病毒所特有的形态；噬菌体的典型形态为蝌蚪形。 （二）病毒的结构 病毒的结构，可分为存在于所有病毒中的基本结构和仅为某病毒所特有的辅助结构。 1．基本结构 指病毒的核心和衣壳，两者构成核衣壳，有些病毒的核衣壳就是病毒粒子，又称为裸病毒。 （1）核心 病毒的核心是病毒粒子的中心结构，其内部充满一种类型的核酸，即DNA或RNA，构成病毒的基因组，为病毒的感染、增殖、遗传