水产微生物实验—理化因素对微生物的影响.docVIP

实验十 理化因素对微生物的影响 基础知识 紫外线对细胞的有害作用是由于细胞中很多物质(如核酸、嘌呤、嘧啶等)对紫外线的吸收能力特强，而所吸收的能量能诱使细胞发生变异，重则导致死亡。经紫外线照射受损害的细菌细胞，如立即暴露在可见光之下，则有一部分可恢复正常活力，称为光复活现象。 紫外线杀菌作用强弱与照射剂量、时间及距离有关，若时间长、剂量大、距离短则杀菌作用强，反之则弱。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此紫外线适用于表面灭菌和空气灭菌。在实践中人们常对接种室，生产车间，外科手术室等用它来灭菌，工业生产和科学研究用它来进行菌种选育。 化学药物对微生物生长的影响不尽相同，作用方式与杀菌机制也有差别。有的在低浓度下只起抑菌作用，而在高浓度下才有灭菌作用；有的和细胞中蛋白质结合，引起蛋白质变性而死亡；有的破坏细胞膜的渗透性，使吸收营养和排泄物功能紊乱失调而死亡；有的对某种微生物有毒害作用，而对另一种微生物则是营养物；有的改变环境的pH值，使微生物无法生长而达到抑菌或杀菌的目的。 因此在实验室内及生产上常利用某些有效的化学药剂进行杀菌或消毒，使用时应注意药品的浓度及使用时其他因素的干扰和影响。 本实验选取物理因素的紫外线和一些代表性的化学试剂进行实验，观察它们对微生物生长的影响。 二、实验目的 1．了解紫外线对微生物生长的影响。 2．了解化学药剂对微生物的作用。 3．学习抑菌圈的测定方法。 三、实验器材 1．器材：30W紫外灯、尖头镊子、无菌培养皿、玻璃刮铲、酒精灯、无菌圆形滤纸片、灭菌黑纸、1mL的无菌吸管、5rnL无菌水试管、恒温培养箱。 2．培养基：牛肉膏蛋白胨营养琼脂。 3．菌种：枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、灵杆菌等液体菌种。 4．药剂：0.1%HgCl2、0.5%AgNO3、0.5%CuSO4、5%石炭酸。 四、实验步骤 （一）紫外线对微生物生长的影响 1．将营养琼脂制成平板； 2．用无菌吸管吸取0.1mL培养18h左右的枯草杆菌或金黄色葡萄球菌菌液分别放入4个营养琼脂平板上，用无菌玻璃刮铲涂布均匀； 3．在无菌操作下，用镊子取小块无菌牛皮纸放在平皿涂菌的表面遮住部分平板，把培养皿放在紫外灯下10-20cm处的台面，打开皿盖，4个平板置紫外灯下分别照射1min、5min、10min和20min； 4．然后关上紫外灯光，并用消毒镊子取出牛皮纸，再盖好皿盖，置于37℃遮光培养24h即观察结果。 5．贴黑纸处有细菌生长，紫外线照射处无菌生长。 （二）化学药剂的抑菌、杀菌作用 1．制平板 取融化的营养琼脂按无菌操作方法，分别倾入4套无菌培养皿中，制成平板。 2．制菌悬液： 取5mL无菌水试管，按无菌操作方法倒入金黄色葡萄球菌菌种斜面，制成菌悬液，同法将大肠杆菌制成菌悬液。 3．接种： 取无菌吸管1支，吸取少量葡萄球菌菌悬液，向第一个培养皿平板上滴1-2滴，再用无菌刮铲将菌液在平板表面涂布均匀，然后在皿盖上注明菌别。同样，将大肠杆菌菌悬液注入不同的平板上，并均各用无菌玻璃刮铲涂抹均匀。 4．放药片： 用无菌尖头镊子将分别沾有0.1%HgCl2、0.5%AgNO3、0.5%CuSO4和5%石炭酸的圆形小滤纸片1块(最好事先浸于药品液后再烘干)放在每个平板表面，每皿贴上标签。 5．培养与结果观察 将各皿放入28℃-32℃恒温培养48-72h后检查结果，如某药剂有抑制作用，则滤纸处四周出现无菌生长的抑菌圈，圈的大小可表示该药剂抑菌作用的强弱。 五、实验结果与思考题 （一）紫外线对微生物生长的影响 记录试验结果并绘图表示平板生长情况。 （二）化学药剂的抑菌、杀菌作用 将实验结果记录入下表： 药剂 菌种 0.1%HgCl2 0.5%AgNO3 0.5%CuSO4 5%石炭酸 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 2