DNA粗提取及鉴定实验改进.docVIP

DNA粗提取及鉴定实验改进DNA的粗提取与鉴定实验是人教版全日制普通高级中学《生物》必修二中要求学生掌握并完成的一个重要实验。实验原理指出：DNA分子在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同，当氯化钠的物质的量浓度为0.14mol／L时，DNA的溶解度最低，DNA析出；利用DNA分子不溶于冷酒精，而细胞中的杂质可溶于冷酒精的性质差别提取含杂质?少的DNA；最后利用DNA遇二苯胺(沸水浴)显蓝色，鉴定DNA。 1　改进原因 和其他实验相比，这个实验的操作过程比?复杂，对实验细节的处理要求更高，实验的成功率相对?低。很多学生在完成此实验时，都很难得到预期的实验效果，甚至很多教师都不能轻易地完成此实验，达不到教材的要求，很难对DNA形成直观的认识。笔者在教学实践中反复试验、总结，针对这个实验成败的几个关键点进行分析和改进，提出以下意见 2　改进意见 2.1　整个实验在塑料烧杯中操作 玻璃烧杯对DNA有吸附作用，会使部分DNA被吸附到烧杯壁上。而塑料烧杯对DNA没有吸附作用，避免了DNA的损失 2.2　用塑料筷子代替玻璃棒 除实验第七步用玻璃棒以外，其他步骤的搅拌和引流操作最好用塑料筷子(塑料筷子对DNA无吸附作用，并且方便实惠)，玻璃棒对DNA也有吸附作用，使部分DNA缠绕在玻璃棒上，导致溶液中DNA含量减少。用塑料筷子操作，可以减少DNA的损失 2.3　第一步搅拌要快、猛、时间充分 实验步骤的第一步在整个实验中最为关键。教材要求“搅拌5min”，很多学生操作的时候，轻轻地缓慢地搅拌，这样很难使细胞充分破裂，所以一定要像打鸡蛋一样使劲搅拌，而且时间必须确保5min，这样才能使鸡血细胞充分破裂，让DNA进入溶液 2.4　确定加入蒸馏水的用量 实验第三步，缓缓加入蒸馏水，析出DNA。由于教材没有给出加入蒸馏水的具体用量，很多学生操作时对加入蒸馏水的量不能有效把握，往往过多或者过少，不能再析出DNA。根据实验第二步中加入2mol／L的氯化钠40mL，可得出此时需要加入蒸馏水的量大约是500mL(氯化钠溶液物质量浓度为0.14mol／L)，充分地析出DNA。但在实际操作中，有时候加入蒸馏水的量在250-300mL时可以最多地析出DNA，分析其原因很可能是第二步溶解DNA时氯化钠的浓度不足2mol／L 3　实验提示 3.1　实验材料处理 实验用的是新鲜的鸡血细胞液，不能用哺乳动物的血细胞(无核DNA)。一些教师在采集鸡血后没有离心或静置沉降就马上用于实验，这种血样未经过沉降或者静置时间不够，鸡血中含杂质成分过多，血细胞浓度?低，实验时释放出的DNA量很少，会导致最后的实验现象不明显。所以，如果没有离心设备的学校在提前处理鸡血细胞液时，一定要静置1～2d，然后取其下沉液，切不可操之过急 3.2　酒精必须冷却 实验第七步“提取含杂质?少的DNA”时，加入体积分数为95％的冷酒精，一定要确保酒精冷却(5℃以下)存放至少24h。冷却的酒精对DNA有凝聚作用。如果不考虑到这一点，只图方便省事，在学生实验前就把酒精的温度摆放在实验桌上，等到学生操作到这一步时，酒精的温度已经变成室温，这样DNA的凝聚效果非常差，几乎不能缠到玻璃棒上。所以，一定要把酒精放入冰箱内存放，待学生操作到这一步时，再立即取出用于实验。如果出现的丝状物?少，可以将此混合液再放入冰箱中冷却几分钟 3.3　不能用自来水代替蒸馏水 自来水具有硬性且含少量微生物，有些城市的自来水还含净化药剂，会影响DNA的提取和鉴定效果 3.4　正确搅拌 实验步骤三、五、七都需要搅拌，教师应提醒学生注意，在进行步骤三、五时，筷子不能直插烧杯底部，而且搅拌要轻缓，以便获得?完整的DNA分子。进行步骤七时，要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间，用手缓慢转动，使DNA充分缠到玻璃棒上 3.5　DNA鉴定 二苯胺溶液容易氧化变质，必须严格按照比例现配现用，其中冰醋酸必不可少，如果不加，无实验现象 沸水浴的时间必须保证5min或以上，才会有?明显的实验现象。沸水浴后静置冷却一段时间，蓝色更为明显。颜色的深浅与DNA的量直接相关。有的实验组由于杂质太多，沸水浴后出现红褐色 在整个实验操作过程中，教师一定要严格按照教材要求定时定量完成。有的学生添加试剂没有定量意识，控制时间也不准确，如果不能确保实验的科学性和严密性，最后就很难达到预期的实验效果 本实验的步骤?多，操作时需要学生认真、耐心，严格按照实验要求完成。中学生由于刚刚接触这样的科学实验，没有形成缜密的实验思维和规范的操作习惯，在实验的很多细节上粗枝大叶、马虎处理，导致实验效果差，甚至失败。细节决定成败，这个实验的诸多细节和关键点，会直接影响实验效