神经氨酸酶NanC体外抗白血病活性研究.pdfVIP

摘要 摘 要 目的: 鉴定通过离子交换层析和亲和层析纯化方法后得到的NanC 蛋白，并探究 NanC蛋白体外对人急性早幼粒白血病细胞株HL60和人急性单核白血病细胞株 THP-1细胞增殖和细胞凋亡的影响，并探究NanC蛋白作用机制。 方法： （1） 用SDS电泳鉴定纯化后的NanC蛋白。 （2） 用MTT法测定不同剂量NanC蛋白对HL60细胞和THP-1细胞细胞增殖， 并用流式细胞数监测Nanc对细胞凋亡的影响。 （3） 采用realtime-PCR和Westernblot方法检测基因mRNA水平和蛋白水平表 达情况，探究NanC蛋白体外抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用机制。 4 Westernblot （） 方法检测NanC蛋白作用涉及到的信号转导途径。 结果： （1）SDS电泳结果显示NanC蛋白纯度较高。 2 NanC （）体外抗肿瘤活性研究发现， 蛋白体外有良好的抗肿瘤活性，能抑制 THP-1细胞细胞增殖，诱导细胞凋亡。 （3）NanC 蛋白体外抗肿瘤活性机制研究发现，NanC 蛋白诱导细胞凋亡作用可 能通过激活凋亡相关基因Bax和下调Bcl-2基因实现。 （4）NanC 蛋白体外对肿瘤细胞活性影响主要通过NF-κB信号转导通路，能有 效调控p65基因表达。 结论： （1）NanC 蛋白在肿瘤研究领域也有一定作用，体外对肿瘤细胞增殖，细胞凋 亡有显著作用，并能激活细胞经典凋亡信号途径。 2 NanC NF- B （） 蛋白体外对肿瘤细胞活性影响主要涉及到 κ 信号转导通路，通 过调控NF-κB信号转导通路家族成员的表达来激活NF-κB信号转导通 路。 关键词：神经氨酸酶NanC；人急性早幼粒细胞株HL60；人急性单核白血病细 胞株THP-1；细胞增殖；细胞凋亡 II 万方数据 Abstract ABSTRACT Objective: We used ion exchage chromatography and affinity chromatography methods purifying NanC protein. To investigate the effects of NanC protein on cell proliferation and apoptosis in human acute promyelocytic leukemia cell line HL60 andhumanacutemononuclearleukemiacelllineTHP-1. Methods: (1).NanCproteinwastestedbySDSelectrophoresis. (2)To assay demonstrated concentrations of NanC protein in cell proliferation, cellcycleandapoptosis. (3).Using realti