分光光度计比浊法测定抗菌物质效价.pdfVIP

E理.，盟盟圃 DOI:IO. 13995/j. cnki. 11 -1 802lts. 201503037 分光光度计比浊法测定抗菌物质效价* 王凯旋，卫兰兰，洪婷，付瑞燕 (安徽农业大学茶与食品科技学院.安徽合肥，230036 ) 摘 要 琼月旨扩散法是测 定抗菌物质效价常用的方法，但人为操作因素常常影响实验结果的准确性。 实验旨在 建立一种测 定准确、操作简单、无需特殊设备的分光光度计比浊法来测定各种抗菌物质的效份。 研究发现，以抑 菌率最高时对应的结养时间为取样时间点.在中等接种量下，在实验浓度范圈内，细菌素 nisin 、类细菌素 NFL 和 2 抗生素琉酸庆大霉素这3 种抗茵物质的浓度与抑菌率之间的线性关系良好， R 值均高 于 0.99 ， 标准曲线成立。 该法适用于设备条件简单的实验室准确测定各类抗菌物质效价。 关键词 分光光度计tt 浊法;nisin; 类细菌素 NFL; 硫酸庆大霉素;抗菌活性 抗菌物质是指具有杀菌或抑菌活性的物质，包括 1. 1. 1 菌种 细菌素、类细菌素和抗生素等生物活性物质。 在过去 金黄杆菌( Chryseobacterium) NHW 菌株、乳酸乳 的 60 多年里，多种能准确测定抗菌物质活性的方法 球菌( Lactococc旧 lact比) NFL 菌株和乳酸乳球菌(L. 先后被提出，包括 ATP 生物发光测定法(ATP Biolu- lactis) 8148 菌株，为安徽农业大学食品微生物实验 rninometry )、绿色荧光蛋白测定法 (GFP bioassay) 、 室保藏。 M甘[ 3 -( 4 , 5-dimethyl thiazol-2-yl) -2 , 5-diphenyl tet- 1. 1. 2 培养基 razoliurn bromide ] 比色法、免疫学方法等 [ 1 叫 ，然而 5TAA 培养基:蛋白陈 20 g ，酵母抽提物 2 g , 使用这些方法简要特殊的试剂或仪器设备，因此没有 K HPO .I g , Mg50. • 7H 0 1 g ，甘油 15 g，琼脂 13 g , 2 2 得到广泛应用。 长期以来，琼脂扩散法( agar diffusion 蒸馆水 1 000 mL ,pH 7. 0 主0， 2 ， 121 Ç下 15 min 灭菌 assay) 因无筒特殊材料，检测成本低! 5 - 6j 而成为测定 后冷却至 40 - 50 Ç左右，加入过滤除菌的链莓索 抗菌物质活性最常用的方法，但是该法耗时耗力、对 500 mg ，环己六亚胶 50 mg 和乙酸盐 50 mg 混匀，用 于培养金黄杆菌 NHW 菌株。 操作人员经验要求高、人为影响因素多，实验者经常 得不到理想的实验结果[ 飞 。 1952 年， Berridge 和 Bar­ MRS 培养基:牛肉浸膏 8.0 g ,Tween-80 1. 0 mL , rett 首次应用微孔比浊法来测定抗生素效价1 ，经过 葡萄糖20.0 g，膜蛋白陈 10.0 g ，酵母抽提物 4.0 g , 日 几十年的不断改进，该法