沉默MTDH基因对胃癌细胞SGC-7901趋化迁移的影响.pdfVIP

摘要 摘 要 目的：胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，当前主要治疗是外科手术联 合放化疗，但是疗效仍不理想，患者 5 年生存率很低。肿瘤的侵袭和转移是其 术后易复发、预后差的最主要原因，而肿瘤细胞向微血管内皮趋化迁移是肿瘤 发生侵袭、转移的基础事件。本研究拟研究 MTDH 与胃癌转移的相关性及 MTDH/AEG-1 对胃癌细胞 SGC-7901 趋化迁移的影响。 方法：采用免疫组化 SP 法检测 MTDH/AEG-1 基因在 30 例胃癌组织及其癌 旁组织和 10 例对照正常组织中的表达；构建针对 MTDH/AEG-1 的干扰载体， 转染胃癌细胞株 SGC-7901，获得稳定细胞株；采用倒置荧光显微镜观察转染效 率；western blotting 检测干扰效率；趋化实验（Transwell ）检测沉默 MTDH/AEG-1 表达的胃癌细胞株 SGC-7901 向人脐血内皮细胞的趋化情况；迁移实验 （Transwell ）检测沉默 MTDH/AEG-1 表达的胃癌细胞株 SGC-7901 的迁移情况。 结果： 1. 免疫组化结果显示：①MTDH 蛋白在胃癌组织的表达情况：胃癌组织的 MTDH 蛋白表达量(86.7%) 明显高于癌旁组织（36.7% ）及对照正常组织（10%, 均 p 0.01) ，且胃癌组织的MTDH 以强阳性表达为主，而癌旁组织及对照正常组织 2 均以弱阳性表达，且后者 MTDH 阳性表达几乎均在肠化腺体胞质及腔缘。○ MTDH 蛋白表达与胃癌临床病理特征相关情况：III~ IV 期胃癌 MTDH 蛋白表达 量（84.2% ）明显高于 I~II 期胃癌(27.3%，p 0.01) ；淋巴结转移组 MTDH 蛋白 表达量（75.0% ）高于淋巴结未转移组(40.0%，p 0.05) ；远处转移组 MTDH 蛋 白表达量（90.0% ）明显高于无远处转移组(33.3%，p 0.01) ；而与组织学分类、 分化程度、年龄、性别以及肿物大小无关（p 0.05 ）。 2. 荧光倒置显微镜镜下观结果显示：3 个重组载体 pGPU6/shMTDH-1,2,3 和一个阴性对照组pGPU6/shMTDH-NC 由脂质体介导成功转染胃癌SGC7901 细 胞，转染效率达 70%左右。 3. Western blot 检测结果显示，以 β-actin 为内参照，转染 pGPU6/shMTDH-3 质粒的 shMTDH-3 干扰效率最高，干扰效率高达 70%(p 0.05) 。 4. Transwell 趋 化 实 验 结 果 显 示 ： 正 常 组 、 阴 性 对 照 组 和 转 染 pGPU6/shMTDH-3 质粒的 MTDH 沉默组向人脐内皮细胞定向趋化的细胞数分别 II 万方数据 摘要 为 55 ±6.7、50 ±5.6、20 ±4.5 ，差异具有显著统计学意义（p 0.05 ），阴性对照 组与正常组比较无统计学差异（p 0.05 ）。 5.Transwell 迁 移 实 验 结 果 显 示 ： 正 常 组 、 阴 性 对 照 组 和 转 染 pGPU6/shMTDH-3 质粒的 MTDH 沉默组向人脐内皮细胞定向迁移的细胞数分别 为 78 ±8.9、70 ±7.5、30 ±6.7，