蛋白质实验技术汇总.ppt

高压灭菌锅操作注意事项 1.在压力到达0 MPa之前，不打开灭菌器盖。 2.压力表出现异常时，应停止使用。 3.打开灭菌锅锅盖时，应充分注意来自灭菌室内的蒸气，防止烫伤。 4.放置灭菌物品时要注意不要碰触损伤内胆中的温度探头。 5、当放气瓶中的水位高于“HIGH”标记时，在灭菌前将水倒出至“LOW”标记。定期更换水。 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 蛋白质实验技术 杨琳（明理楼107） 课程介绍 选修课 选修课（34学时，2×16） 期末考试－闭卷笔答 成绩合算－期末×0.5＋平时×0.25+论文/上课讲解 自编讲义 课程内容： 介绍蛋白质性质、表达、分离、纯化以及鉴定过程中所涉及到的基本技术的基本原理、应用范围及注意事项。 主要参考书： 1『生物化学』－面向21世纪课程教材（第三版） 王镜岩,朱圣庚,徐长法主编 高教出版社 2『蛋白质技术手册』 汪家政，范 明主编 科学出版社 3『生物化学与分子生物学实验常用数据手册』 吴冠芸，潘华珍，吴 恽主编 科学出版社 4『蛋白质纯化指南 』 （第二版） R.R. 伯吉斯, M.P. 多伊彻 编著 陈薇 主译 科学出版社 5『蛋白质分析实验技术指南』李玉花 主编 科学出版社 第一章 绪论 牛胰岛素 人源葡萄糖转运蛋白GLUT1 牛胰岛素 提出---1958年与美、德科研小组同时独立提出这一课题 背景---1958年，没有不可征服的科学高峰 初期： 短暂的正常研究阶段 （已获得拆、合天然胰岛素等几项重要的成果。 ） 牛胰岛素 高潮：混乱的大兵团作战 （正常的科研程序被严重干扰；对参与研究的人员造成了很大的身体伤害 ） 苦撑：北大最少时只剩下两个科研人员 攻关：各单位放弃内部竞争通力协作，终于结出硕果 。 诺贝尔奖？ 1923年，班丁(F．G．Banting)和麦克劳德(J．J．R．Mac．1eod)因为发现胰岛素和使用胰岛素治疗糖尿病而荣获了医学和生理学诺贝尔奖； 1955年，维格纳奥德因为合成多肽激素催产素而获得诺贝尔化学奖； 1958年，桑格因为分离和确定胰岛素的氨基酸组分的构成而荣获诺贝尔化学奖； 1972年，安芬森(C．B．Anfinsen)等人因为发现氧化被还原的核糖核酸酶肽链能恢复活力而获得诺贝尔化学奖； 1984年，梅里菲尔德(R．B．Merrifleld)因为发明固相合成方法而获得诺贝尔化学奖。 葡萄糖转运蛋白 细胞的葡萄糖摄取通道 易化扩散 与糖尿病的关系 与肿瘤的关系 Mueckler, M. et al. Science 229, 941–945 (1985) Amann, T. Hellerbrand, C. Expert Opin. Ther. Targets 13, 1411–1427 (2009) 葡萄糖是地球上各种生物最重要、最基本的能量来源，也是人脑和神经系统最主要的供能物质。 须依靠转运蛋白这个“运输机器”来完成 1，催化剂 －酶（碳酸酐酶） 2，结构成分 －胶原蛋白 3，贮藏功能 －麦醇溶蛋白（小麦种子） 4，运输功能 －血红蛋白（氧分子），跨膜运输 5，运动功能 －肌肉收缩，细菌鞭毛 6，激素 －胰岛素，生长激素 7，防御（免疫） －抗体（免疫球蛋白） 8，接受、传递信息 －视觉，味觉 9，调节生长发育 蛋白质主要功能 功能紊乱导致的疾病 导致：婴儿癫痫发作、Fanconi-Bickel综合症、糖尿病、肥胖 Thorens, B. Mueckler, M. Glucose transporters in the 21st Century. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 298, E141–E145 (2010) 功能紊乱导致的疾病 GLUT1功能完全缺失将致死 GLUT1在癌细胞的新陈代谢过程中也发挥着重要功能。 Macheda, M. L., Rogers, S. Best, J. D. Physiol. 202, 654–662 (2005) 饿死癌细胞？ 结构解析 酵母表达系统 昆虫表达系统 哺乳动物细胞表达系统 表达的蛋白具有正常的活性、构象 技术难度较大、耗时、耗资 大肠杆菌表达系统 实验技术简单，时间较短，费用低，系统比较完备 不能有