中性盐对谷氨酸脱羧酶活性的影响机制.pdfVIP

第21卷第6期 分 子 催 化 V01．21．No．6 2007年12月 J0UI AL OF MOLECULAR CATALYSIS(CmNA) Dec． 20(y7 文章编号：1001-3555(2007)06-0556-05 中性盐对谷氨酸脱羧酶活性的影响机制 杨胜远 ．-，陆兆新¨，吕凤霞 ，别小妹 ，焦 阳 ，孙力军 (I．南京农业大学食品科学技术学院，江苏南京210095；2．韩山师范学院生物系，广东潮州521041) 摘 要：通过不同阳离子和不同阴离子对唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus s subsp．thermophilus)谷氨酸 脱羧酶活性的影响以及NaNO 对不同蛋白质浓度的谷氨酸脱羧酶活性的影响进行考察，结果表明：中性盐对谷氨 酸脱羧酶活性的影响不是由于增加蛋白质亚基间的疏水作用引起的，而可能是由中性盐对谷氨酸脱羧酶活性的弱 抑制作用与中性盐增加了谷氨酸脱羧酶的胶体体系稳定性共同作用所致，同时还可能与中性盐降低了反应体系 C 的溶解度有关． 关 键 词：谷氨酸脱羧酶；唾液链球菌嗜热亚种；盐；机制；疏水作用 中图分类号：0643．3 文献标识码：A 氨基酸脱羧反应是由丙酮酰(pyruvoy1)或磷酸 yl FF疏水层析和Sephadex G一100凝胶层析，获 吡哆醛(pyridoxal 5 phosphate，PLP)作为辅酶的两 得了电泳纯GAD【10]．作者在研究化学物质对GAD 类酶所催化的，其中依赖于PLP的脱羧酶可分为4 的影响中发现，5 mmol·L 的NaC1、KC1和HCI 群，目前研究最多的是第2群中的谷氨酸脱羧酶 等中性盐对GAD活性有轻微的抑制作用或没有影 (glutamate deearboxylase，GAD，EC．4．1．1．15) ¨． 响，但在50 mmol·L 时却对GAD活性呈现促进 GAD是生物体催化L一谷氨酸发生不可逆 一脱羧生 作用．Fond… 也发现NaC1可以促进Eseheriehia co— 成 一氨基丁酸( —aminobutyrie acid，GABA)和cO2 li GAD的活力，但是Ueno等¨ 却发现NaCl对 的唯一酶．由于GABA具有降血压、利尿、镇痛安 Lactobacillus brevis GAD的活性没有影响，而 神、改善脑机能、增进脑活力、促进长期记忆、营 (NH4)2SO4、Na2SO4和MgSO4对Lb．brevis GAD活 养神经细胞、改善更年期综合症等重要生理功 性有促进作用，且(NH )2SO Na2SO MgSO ． 能 j，因此GAD的研究开发已成为新的研究热点． Ueno等人认为由于中性盐增加了酶蛋白亚基间的 D一氨基酸是生产医药、食品添加剂和农用化学品等 疏水作用，从而促进GAD的活性．然而中性盐对 的重要原料 j，目前报道的不同来源的GAD均具 Streptococcus salivarius subsp．thermophilus GAD活 有很高的底物特异性，只对L一谷氨酸具有催化作 性的影响并不符合疏水作用规律．本文对中性盐对 用，而对D 谷氨酸没有催化作用 J，因此GAD还 GAD活性的影响机制进行了报道． 可以用于D一谷氨酸生产中对DL一谷氨酸的拆分．研 1材料与方法 究表明，GAD与芽孢杆菌的孢子萌发和原核微生物 的抗酸机制有关 曲j，可见GAD在微生物生理中 1．1 GAD来源 具有重要作用．因此进行GAD研究，在理论上和应 来自Streptococcus salivarius subsp．thermophilus 用上均具有重要意义． Y-2．经过(NH ) sO 分级沉淀、等电点沉淀、DE— 在前期研究中，唾液链球菌嗜热亚种 AE—Sep