华美游仆虫大、小核的透射电镜和生化抽提扫描电镜观察.pdfVIP

第46卷 第6期 复旦学报 (自然科学版) V01．46 No．6 2007年l2月 Journal of Fudan University(Natural Science) Dec．2007 文章编号：0427—7104(2007)06—0968—04 华美游仆虫大、小核的透射电镜和 生化抽提一扫描电镜观察 赵 柳，尹 飞，倪 兵，顾福康 (华东师范大学生命科学学院，上海200062) 摘 要：应用透射电镜术和生化抽提一扫描电镜术显示，华美游仆虫大核核膜表面形成孔状结构，并有相当数量 的附着物；小核核膜表面也有孔状结构，但附着物较少．此外，非分裂期大核染色质凝缩排列形成染色质团，染色 质团由染色质颗粒构成，各个染色质颗粒含有许多均质的染色质小体；大核DNA合成期间，大核复制带区的染 色质团分解成染色质小体．据所得结果认为，染色质小体是构成游仆虫大核的基本结构单元；大、小核形态上的 差异与其在无性生殖期间核、质问的功能活动及物质联系有关． 关键词：华美游仆虫；大核；小核；透射电镜术；生化抽提一扫描电镜术 中图分类号：Q 954 文献标识码：A 原生动物纤毛虫细胞含有大核和小核两种类型的细胞核，其中大核与细胞无性生殖有关，它可能专管 细胞的全部遗传活动，而小核则是细胞有性生殖的功能核，因此，其细胞的遗传也与小核有关…1．对纤毛 虫细胞核的形态学通常采用显微染色或透射电镜术来显示细胞核的结构．但是，前者是应用光镜水平的观 察，虽能观察到核的全貌，却很难清晰分辨核的结构细节；后者是超薄切片在高放大倍率下得到的超显微 结构，需对所得结果作三维构建，才能取得核的整体结构形态．几年前，Arikawa等尝试用生化抽提结合扫 描电镜术的方法，显示纤毛虫大核的立体构型，取得了初步的成功L2 J．作者所在实验室在此方法的基础 上，对样品制备方法进行了改进，取得较好的结果L3 J．本文应用透射电镜术和生化抽提一扫描电镜术，显示 了腹毛目纤毛虫华美游仆虫(Euplotes elegans)的细胞大、小核，详细观察了大、小核核膜的表面以及去膜 后的大核染色质和染色质DNA复制区的结构． 1 材料与方法 1．1 实验材料 华美游仆虫于2003年春采自上海市青浦区淡水池塘，经分离后以鞭毛虫草履唇滴虫(Chilomonas paramecium)为食料进行培养并建立纯系．在20℃条件下，每日早晚喂食鞭毛虫，数日后游仆虫达到较高 密度时，取生命周期中不同时期的细胞进行实验．为了获得较高密度的分裂期细胞，可先将细胞饥饿3～4 d，然后喂食鞭毛虫，18～24 h后再进行实验． 1．2 透射电镜样品的制备与观察 参照本实验室以前报告的方法[ ，取洁净纤毛虫，在4℃下，应用1％锇酸和3％戊二醛混合液固定 30 min．此后，细胞用0．1 mol／L磷酸缓冲液洗涤，等级梯度酒精脱水后，将细胞进行包埋，超薄切片和染 色，JEM100CX透射电镜观察和照相． 1．3 生化抽提一扫描电镜术 参照本实验室以前报告的方法[引，先收集洁净纤毛虫，加入等体积甲基绿溶液(2 mg／mL)，用0．5％ 收稿日期：2007—08—12 基金项目：国家自然科学基金资助项目 作者简介：赵 柳(1983一)，男，博士研究生；通讯联系人顾福康，男，教授，E-mail：fkgu@bio．ecnu．edu．cn 第6期 赵 柳等：华美游仆虫大、小核的透射电镜和生化抽提一扫描电镜观察 969 T iton X一100处理，离心去上清，用略大于细胞的微吸管吸吹，镜检，至大部分细胞破碎、暴露出大核和小 核(高速离心得到的沉淀物主要是小核) ]时，将样品滴于涂被多聚一L一赖氨酸(1O0 mg／mL)的小块盖玻片 上，静置20 min后用滤纸吸去上层液体(此时细胞核保留着核膜)，或将盖玻片放人1％乙酸中处理5 rain 以除去核膜．此后，细胞核样品经过扫描电镜样品制备后 引，在JSM5610LV扫描电镜观察． 2 结 果 2．1 透射电镜观察 2．1．1 大核 非分裂期游仆虫大核中，核膜呈波纹状，膜内面附