商品长白杂交猪IgAH链CH1-CH3区基因的克隆与表达.pdfVIP

· 22· Animal Husbandry Veterinary Medicine 2007 Vo1．39 No．10 商品长白杂交猪IgA H链CH1-CH3区 基因的克隆与表达 李云岗 ，孙稳平 ，李新生 ，高凤山 ，郝慧芳 ，夏 春h (1．中国农业大学动物医学院，北京 100094；2．山东省畜牧兽医总站，山东济南 250022；3．陕西省畜牧兽医总站，陕西西安 710016) 摘要：在猪ISA重链CH1·cH3区设计一对引物，用RT．PCR方法从地方杂交品种长白猪肠系膜淋巴结组织中扩增出预期大小的片断，插入pGEM． T easy载体。测序并与约克夏猪、人及其他动物的IgA进行序列比较。随后。将该序列酶切后引入到pQE-30表达载体相应位点，转化JM109大肠 杆菌，经IPr 诱导表达后，进行SDS·PAGE分析。结果显示，本研究克隆了猪IgA重链恒定区部分CH1亚区及完整的cH2．cH3亚区基因序列， 全长822 bp，编码274个氨基酸，该序列与GenBank上登录的约克夏猪参考序列核苷酸序列同源率为99．8％。有2处核苷酸变异，氨基酸序列的 同源率为100％。但与人及其他动物显示从84％一51％不等的同源性；在大肠杆菌表达出约31 ku的蛋白条带，表达量约占菌体总蛋白的32．3％。 本试验为今后的IgA免疫功能研究及基因工程化检测试剂开发打下了基础。 关键词：IsA；CH1．CI-I3；猪；表达 中图分类号：$828．82 文献标识码：A 文章编号：0529．5130(2007)10。0022．04 Cloning and expression of CH1-CH3 domain gene of IgA heavy chain from an outbred Landrace pig LI Yun-gang ，SUN Wen-ping ，LI Xin-sheng ，GAO Feng-shan ，HAO Hui．fang ，XIA Chun (1．Department of Microbiology and Immunology，College of Veterinary Medicine， China Agriculture University，Beijing，100094，China； 2．Shandong Province HusbandryVeterinary Service Station，Jinan 250022，China； 3．Shaanxi Province HusbandryVeterinary Service Station，Xian 710016，China) Abstract：According to the sequence of IgA gene from GenBank，a pair of primers containing Kpn I and n／nd lll restriction enzyme-clear- 作者简介：李云岗 (1971．)，男，高级兽医师，博士。 收稿日期：2007．02．12 通讯作者。 格抗体，既与抗原的免疫原性有关，又与免疫动物种类及个体 参考文献： 状况、免疫程序等有关。抗原的免疫原性一般涉及两个方面： 半抗原与载体蛋白的偶联率大小和半抗原一蛋白质分子的立体 [1] 陈杖榴．兽医药理学 [M]．北京：中国农业出版社，2002： 结构的复杂程度。一般来说载体与半抗原的分子的最佳偶联率 140．141． ． 为5—15为宜 。但也有试验结果表明，半抗原结合比的大小 [2] 杨杏芬．环境雌激素污染与毒效应研究的现状与展望 [J]．广 对诱导抗体产生并无决定性的影响，每分子蛋