用替代对照品羟苯乙酯高效液相色谱方法测定大蒜辣素.pdfVIP

第36卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第8期 Chinese of 1083—1088 2008年8月 JournalAnalyticalChemis时 用替代对照品羟苯乙酯高效液相色谱方法测定大蒜辣素 袁耀佐1，2 顾洁3 杭太俊n’3 钱文1 陈坚4 张正行2’3 1(江苏省药品检验所，南京210008) (中国药科大学药物分析室2，药物质量与安全预警教育部重点实验室3，南京210009) 4(新疆医科大学药学院，乌鲁木齐830054) 摘要大蒜辣素极不稳定，制备供含量测定用对照品非常困难。大蒜辣素在溶液中相对稳定，用高效制备 的结构，用衍生化紫外分光光度间接测定法和EP5．0收载的类似方法分别测定该溶液含量，确定该溶液中大 mm×4．6 蒜辣素的含量为0．719mg／mL。以此溶液为基准，在条件为：Alhech mm，5trm)，流动相 C18柱(250 为甲醇-0．4％甲酸(65：35)，流速为1．0mL／min，检测波长242nnl，考察性质稳定而又易得的羟苯乙酯与大蒜 辣素之间的校正因子。结果显示，测得1mg羟苯乙酯相当于4．71mg的大蒜辣素，该换算关系适用于大蒜辣 素为0．018—2．9g／L的浓度范围，该方法与EP5．0的方法相比，分析时间明显缩短。 关键词大蒜辣素，羟苯乙酯，高效液相色谱，替代对照品 1 引 言 大蒜主要具有抗感染、防治心血管疾病和抗肿瘤等功效…。目前公认大蒜的功效成分是蒜酶(Alli- inase，EC4．4．1．4)催化裂解s一烯丙基一L-半胱氨酸亚砜(S—allyl-L—cysteine 降解过程参见文献[2]。由于大蒜功效成分的分离、提取或人工合成十分困难，而且化学性质极不稳 定，易分解，无法长期保存”J。目前国内外的研究思路是从鲜蒜中分别提取化学性质相对稳定的蒜氨 酸及蒜酶，制成蒜氨酸／蒜酶复合制剂，让其在体内释放大蒜辣素，充分发挥疗效。 测定大蒜辣素含量测定方法报道很多，有定硫法【4J、电化学方法【5J、生物检定方法MJ，薄层扫描 检定方法是利用大蒜辣素的抗菌活性进行测定，专属性差；薄层扫描法为半定量方法，紫外法需要进行 衍生化(利用吸收系数法)，且衍生化的专属性不强，测定是一类化合物的总和；高效液相色谱法 (HPLC)等测定大多需要采用大蒜辣素对照品进行对照，由于大蒜辣素稳定性差，其对照品的制备、标 化和储存都很困难，限制了该方法的应用。 欧洲药典5．0收载的Garlic powder中¨1。，将大蒜辣素列为大蒜粉质量控制指标，采用羟苯丁酯作 为大蒜辣素的替代对照品，分别测定大蒜辣素与羟苯丁酯的峰面积，按1mg羟苯丁酯相当于8．65mg 的大蒜辣素的关系计算大蒜辣素的量，对该方法考察时发现，该方法存在以下不足：(1)分析时间长，大 蒜辣素与羟苯丁酯之间的色谱保留相差太大(大蒜辣素在5min左右出峰时，羟苯丁酯的出峰时间约为 23 需要多步稀释，给实验操作也带来不便。本研究在EP5．0方法的基础上，建立了分析时间更合适、适用 范围更广的替代对照品HPLC法，供测定蒜氨酣蒜酶复合制剂的大蒜辣素含量。 2 实验部分 2．1仪器与试样 2007-12-05收稿；2008-02-02接受 ·E-mail：h∞gtj@cpu．edu．cn 1084 分析化学 第36卷 MHz H核 磁共振光谱分析仪(Br