心肌样微环境诱导脂肪干细胞分化的研究.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2009, 36(5): 624~632 肌样微环境诱导脂肪干细胞分化的研究* 1) 1)** 1) 1) 2) 朱艳霞 刘天庆 宋克东 马学虎 崔占峰 1) ( 大连理工大学干细胞与组织工程研发中心，大连116024; 2)Oxf ord Centre f or Tiss ue Engineering and Biop rocessing, Dep artment of Engineering Sc ience, Oxf ord University, Oxf ord OX 1 3PJ, UK) 摘要 微环境在促进干细胞分化过程中起着重要的作用，研究心肌样微环境介导脂肪干细胞向心肌细胞分化有重要意义 将 脂肪干细胞与心肌细胞直接或通过细胞培养小室间接共培养，检测脂肪干细胞的分化情况 对于直接共培养体系，采用绿色 荧光蛋白CFSE 对脂肪干细胞进行标记，然后与心肌细胞以 1 ∶5 混合后进行直接共培养，2 周后，通过流式细胞仪分选分化 的脂肪干细胞，并检测其分化情况 检测方法包括：扫描电镜和透 电镜观察细胞的超微结构；免疫细胞化学检测心肌特异 性肌球蛋白重链(MHC)、肌钙蛋白(Tn ) 和连接蛋白(Cx43)；Western blot 定量分析；RT-PCR 检测心脏特异性转录因子 mRNA 的表达 结果表明，分化的脂肪干细胞呈现心肌样超微结构，并表达心肌特异性蛋白和转录因子，并且直接共培养体 系中分化的脂肪干细胞其表达率明显高于间接共培养体系中的表达率 因此，在心肌样微环境中，除了可溶性细胞因子对分 化起作用以外，心肌细胞产生的机械牵拉对脂肪干细胞向心肌细胞分化也起着重要的作用 关键词 脂肪干细胞，心肌细胞，共培养，肌钙蛋白，连接蛋白 学科分类号 R318 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2008.00599 [6] 心肌梗死是发病率和死亡率最高的疾病之一， 得成功 ，提示心肌微环境对脂肪干细胞的分化发 目前的治疗包括药物治疗、介入治疗和搭桥手术， 挥着重要作用 但也有研究者认为，在心肌样微环 [7] 虽能缓解症状，甚至 闭塞的血管再通，但不能够 境中干细胞分化为心肌细胞属于随机事 ，将心 替代坏死心肌 心脏移植虽能彻底改善心脏状态， 肌细胞与骨髓间充质干细胞进行间接共培养，或用 但供体少，费用高，临床很难广泛开展 尽管研究 培养过心肌细胞的培养液来培养骨髓间充质干细 [1] 发现，心肌组织中存在心脏干细胞 ，但数量稀 胞，这两种方法培养的骨髓间充质干细胞中均未发 少，很难满足 面积心肌梗死心肌再生的需求，因 现心肌细胞特异性蛋白表达[8, 9] 此外，干细胞与心 此，人们一直在探讨采用其他干细胞转化为心肌细 肌细胞之间的直接接触是否是诱导干细胞向心肌细 胞的可能性 脂肪组织中存在 量的干细胞，即脂 胞分化的必要条 ，也有很多不同的观点[8, 10, 11]