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贵阳市α-地中海贫血分子流行病学研究 临床检验诊断学 林靖 导师：黄盛文 主任医师 摘要： 目的：研究贵阳地区α-地中海贫血的发生率以及基因型分型；了解 新生儿脐血的红细胞参数的特点及不同孕周新生儿脐血 Hb 成分的变 化。 方法：（1）应用琼脂糖凝胶电泳技术，得出新生儿脐血的血红蛋白 电泳结果。筛选Hb Bart’s 含量阳性的标本进行基因检测。(2) 应用基因组 DNA 提取技术，对新生儿脐血的基因组 DNA 进行提取并测定浓度和纯 度。应用跨越断裂点聚合酶链反应（跨越断裂点 PCR）技术对已提取 的新生儿脐血基因组 DNA 进行体外扩增，并应用琼脂糖凝胶电泳技术 对扩增产物进行分析；应用聚合酶链反应 （Polymerase Chain Reaction）结合反向点杂交 (Reverse Dot B lot )技术（PCR 结合 RDB）， 对已提取的新生儿脐血基因组 DNA 进行体外扩增并分析结果。(3) 采 用血细胞五分类仪，得出新生儿脐血的 6 项红细胞参数，包括 RBC 、 HB 、HCT 、 RDW 、MCV 和MCH ；应用琼脂糖凝胶电泳技术，检测新生 儿脐血的血红蛋白的成分和组成； 结果：（1）在1219 份脐血样本中共有36 份检出Hb Bart’s 阳性结果，初步诊 断为α-地贫，总检出率为2.95 % （36/1219）。根据Hb Bart’s 含量初步进行分 型，静止型12 例，标准型23 例，中间型1 例，未检出重型α-地中海贫学；（2） 基因检测共检出36 份 α-地中海贫血阳性结果，总检出率为2.95 % （36/1219）， 其中，静止型12 例（包括 -α3.7/ αα 和 -α4.2/ αα），标准型23 例 （--SEA/ αα ）， 中间型1 例（血红蛋白H 病，包括 --SEA/ -α3.7 和 --SEA/ -α4.2 ），未检出重型α- 地贫.基因组检测未检测出非缺失型α-地中海贫血； （3）1219 例新生儿脐带血 血常规中的6 项红细胞参数中男性新生儿的RBC 、HB 、HCT 、 RDW 高于女性 新生儿，MCV 和MCH 低于女性新生儿；足月产儿的HB 、MCV 、MCH 、RDW 均低于早产儿，顺产新生儿的RBC 、HB 和HCT 均高于剖宫产新生儿；除新生 儿的RBC 低于成人，其余5 项红细胞参数均高于成人，除RBC 外，女性新生 儿其余5 项参数均高于女性成人；Hb Bart’s 阳性组新生儿脐血RBC 显著高于 Hb Bart’s 阴性组，而HB 、MCV 、MCH 、HCT 均显著低于Hb Bart’s 阴性组。 并且新生儿HbA 的相对含量随着孕周的增加呈上升趋势，而HbF 的相对含量随 着孕周的增加呈下降趋势； 结论：贵阳地区α-地中海贫血的发生率诶 2.95 %，以标准型 α -地 中海贫血 （--SEA/ αα ）为主；新生儿α-地中海贫血患者从出生起就表 现为小细胞低色素性贫血，表明红细胞参数对筛查的意义，对于血红蛋 白电泳Hb Bart’s 阳性者，可初步确诊为α-地中海贫血， 关键词：α-地中海贫血 新生儿脐血 血红蛋白电泳 分子流行病 学 基因诊断 前言： 地中海贫血 （Thalassemia ），包括α-地中海贫血是最常见的人类遗传病，以 [1] 每年超过30万人的诞生，在世界各地都产生严重的影响 。随着分子生物学技术 的发展，人们总结出地中海贫血发生的一般分子机制。地中海贫血包括α、β、γ 、 δ等几种亚类,其中以α-地中海贫血最为常见。α-地中海贫血 （α-Thalassemia ）， 简称α-地贫，是由于α-珠蛋白基因缺失或点突变，使α-珠蛋白合成减少或者相对 减少，导致无效造血和红细胞的破坏。 α-珠蛋白基因簇位于人体16号染色体短臂一区三带（16p13.3），含有一个胚 胎期表达的基因，两个胎儿期和成人期表达的基因，两个假基因和两个疑似珠蛋 白的基因，顺序为5ˊ-δ-ψδ-ψα2-ψα1-α2-α1-θ-3ˊ 。由于人体在不同的时期对氧气的 需求不同，所以在不同的时期所表达的血红蛋白也不同，并且按照5ˊ--3ˊ的