血浆中游离还原型及氧化型谷胱甘肽的荧光测定法.pdfVIP

第25卷，第11期 2OO5年11月 and SpectrOsoopySpectralAnalysis N。ver】小er，2005 血浆中游离还原型及氧化型谷胱甘肽的荧光测定法 王秋林1’2，王浩毅1，丁怡1，乔小蓉3，彭克军1，林霞4，王树人¨ 1．四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室，四川成都61004l 2．成都医学院第一附属医院内一科，四川成都610500 3．四川大学分析测试中心，四川成都61004l 4．四川大学华西基础医学与法医学院法医病理教研室，四川成都610041 摘要文章建立了快速、可同时检测血浆中游离的还原型和氧化型谷胱甘肽(即GsH和cSSG)的方法， GsSG进行定量分析。并运用此方法测量青年健康志愿者静脉血中的游离GSH和GSsG。该法最低可检测出 测定管中11．4 pnlol·L-1GsH以及5．7 黜批内和批间变异系数分别为3．5％和4．1％，GsH，黜加标准品后的回收率分别为(99．77± mL_1和(1．7±0．35)nmd·mL一。 主题词 血浆；GSH；GSSG；荧光测定法 中图分类号：0657．3文献标识码：A 文章编号：1000—0593(2005)11—1834—05 及GSSG进行定量测定。 引 言 1材料与方法 谷胱甘肽(GSH)是一种体内广泛存在的由谷氨酸、半胱 氨酸和甘氨酸组成的含硫醇三肽化合物。GSH作为细胞的一 1．1试剂 种还原剂，参与多种重要的生理过程，可保护细胞免遭氧化 损伤，解除药物代谢产物的毒性，调节基因表达和细胞凋 亡，并与物质的跨膜转运相关。GsH参与抗氧化作用后，2均为国产分析纯试剂。 分子的GSH脱氢生成氧化型谷胱甘肽(GSSG)，在NAⅨ)H mol 以及谷胱甘肽还原酶的作用下GSSG又不断被还原为GsH，缓冲液(PI垮)内含0．1mol·L-1的磷酸氢二钠以及0．005 多余的GsSG则排出胞外，以维持GS吲GssG氧化还原对的·L-1的EDTA—Na2(pH 正常氧化还原状态。血液中的GSH主要由肝细胞分泌，在 肺、肾等组织中被利用分解，水解后的氨基酸成分经血液循 环被肝或其他器官摄取重新合成GsH。研究显示血中GSH 用10％MPA各配成2 及GsSG可用来反应机体氧化还原内稳态的改变…。目前有 多种方法可对GSH以及GSSG进行测量，但却因特异性不强别含200眦10l·mL。1GsH和100姗10l·mL_1GSSG的混合工 或因仪器贵重而不易推广，且目前尚无标准的方法对血浆中 作液。实验过程中所用水均为去离子双蒸水。 的GsH以及GSSG进行定量。我们参考已有的测量方法，建1．2仪器 立了一种快速而简便的荧光测定法，利用二硫苏糖醇(聊盯) 将GssG还原为GsH，以及在pH8．O时GSH与邻苯二甲醛光度计。 (OPA)结合生成可发荧光的物质，从而对血浆中的GsH以1．3荧光波长的确定 收稿日期：2004一06—28。修订日期：2004—09—08 基金项目：四川省科技厅重点科技项目(02sY029．123)资助 作者简介：王秋林，1971年生，成都医学院第一附属医院讲师，主治医师，博士研究生 *通讯联系人 第11期 光谱学与光谱分析 1835 用睽、H和㈣标准品按表l程序中的B’和C’操作，度计对样品进行全波长扫描，以确定激发波(A。)波长和发 加入0PA30min后，利用日本岛津RF一5000型荧光分光光 射波(A。)波长。