血清白蛋白-氯化铜-壳聚糖体系共振瑞利散射法测定壳聚糖.pdfVIP

第35卷 分析化学(FENx【HuAxuE)研究报告 第!l期 Chjnese 0f 619一1624 2007年11月 J“umalAnalyticalChemistry 血清白蛋白-氯化铜-壳聚糖体系共振瑞利散射法测定壳聚糖 杨季冬“。 邓世星1，3周尚1 (西南大学化学化工学院，重庆400715)2(长江师范学院化学系，重庆408003) ’(遵义医学院药学系，遵义563003) 摘要在pH6．5的B-R缓冲溶液中，壳聚糖与血清白蛋白作用，体系的共振散射光谱较弱；当加入cu“ 后，使cu¨与血清蛋白的浓度比为lO：1时，反应形成三元配合物。三元体系的共振瑞利散射(RRs)光谱显 著增强，并形成新的RRs光谱，其光谱增强程度与壳聚糖古量呈线性关系。实验考察了BsA和HsA分别与 nm和480nm cu(Ⅱ)和壳聚糖形成的三元体系，以及反应条件和机理，对于BsA体系，其最大RRs峰位于350 ol～4 两处，而HsA体系的最大RRs峰位于3柏nm处，两个体系的线性范围和检出限分别是oOm∥L和 O 3．7彬L、0．ol一6mg／L和11肛g／L，其RsD均小于4．O％。显然，BsA体系有较高的灵敏度。据此可建立 起RRs技术分析测定痕量壳聚糖的简便、快速和高灵敏度的新方法。同时，考察了共存物质的影响，表明方 法有较好的选择性。将此法用于测定保健胶囊和自制壳聚糖租品中壳聚糖的测定，结果满意。 关键词壳集糖，共振瑞利散射，牛血清白蛋白，人血清白蛋白 1 引 言 性多糖，即以口(1，4)苷键串连的氨基葡萄糖线性大分子。壳聚糖具有复杂的双螺旋结构，分子结构中 因有一oH、一NH：基团而具有较强的反应活性。由于它具有天然无毒和良好的生物降解性、生物 相容性等生物活性，被广泛应用于环保、医药、农业、化妆品和食品工业等领域“’2J。通过壳聚糖与DNA 和蛋白质的相互作用的研究，逐步揭示其杀菌消炎，抗肿瘤，降血脂，增强免疫力，体内排毒等机理，及其 与机体组织的亲和作用，且不与体液起反应也无抗原作用的功效”。J。目前壳聚糖在分析化学上也有 广泛的应用，主要利用壳聚糖及其衍生物结构中的一NH，和—oH，可直接用于分离富集待测物”l。 或制作成修饰电极应用于电分析化学”1，也制作成同定酶技术的生物传感器”o，因而对于壳聚糖本身 的分析测定尤显重要。文献已报道有酸碱滴定法”1、分光光度法“…、红外光谱法”“、荧光法“2’”1和荧 光猝灭法”“．这些方法的灵敏度和选择性均不太高。本研究以共振瑞利散射(RRs)光谱技术和同步荧 光方法探索壳聚糖与蛋白质在cu2+存在下的相互作用机理，并探讨了反应条件。实验发现，cf+介入 nm的同步荧光也发生变化，说明相互作 血清自蛋白与壳聚糖体系后，其RRs光谱强度剧增，其△A=15 用影响蛋白质的构型。且因RRs光谱增强值与壳聚糖的浓度成正比，据此建立了一种测定壳聚糖的新 方法。本法具有较高的灵敏度和选择性，并用于实际样品测定，结果满意。 2实验部分 2．1仪器和试剂 海宇隆仪器有限公司)。牛血清白蛋白(BsA)、人血清白蛋白(HsA，中国医药集团上海化学试剂公 司)，用水配成储备液，浓度均为1 x10。ⅡmL／L。可溶性壳聚糖(cT5， x10—moL／L，使用时稀释至1．5 3一lO的Bitton-Rob— Sigma-Aldich，Japan)，配制50．0m∥L储备液，使用时再用水稀释致所需浓度；pH ir—n(B-R)缓冲溶液，用酸度计校正酸度值。其余cucl，等试剂均为分析纯，实验用水为二次