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第36卷 分凝辱l：学(FENXIHUAXUE)研究报告 第l◇期 2008年lO月 of 1343～1348 Journal Chemistry Ch．inese Analytical 血红蛋白模拟酶催化荧光法测定葡萄糖 席永清k2邱海鸥2 杨明2’3 庄惠生¨ 1(农华犬学环境科学与工程学院，上海201620)2(中网地质大学材料科学与化学工程学院，武汉430074) 3(东鬻大学分斩测试中心，上海201620) 擒要 建立了测定葡萄糖的血红蛋向模拟酶催化荧光法。采用斜率法，利用血红蛋白的过簸化物酶催化 活性，光毒性的厶酪氯酸作为荧光底物，蹄GOD催化氧化葡萄糖的反应进行偶联，成功的测定丫果蔬组织液 中的黼萄糖并获得了缴健实验条件。考察缓冲溶液pH和浓度对荧光斜率的影响，发现在高pH条件下采用 NH3-N毪CI溶液有荧光增强捧霜。于挽物质对测定H202的影响也进季亍了考察。荧光法对反波产物溯定，l三{ x x10。 3倍标准傣差计算蘩蕊糖检出限为1．3×10～mol／L，线性藏隧为5。010～一l。2×10～moL／L。对4．0 mol／L的葡萄糖溶液测定相对标准偏差为3．79％(，l=9)。率法成功地应用于果疏中葡萄糖的测定。 关键词血红蛋白，葡麴糖，催化荧光法 1 引 言 ． 葡萄糖是生物体内新陈代谢不可缺少的营养物质。它的氧化反应放出的热量是人类生命活动所需 能量的重要来源。葡萄糖以游离的形式存在于植物的浆汁中，尤其以水果和蜂蜜中的含量为多。葡萄 糖检测的经典方法是利用葡萄糖氧化酶(GOD)催化氧化葡萄糖产生过氧化氢，剩用辣根过氧化物酶 (HRP)催亿过氧讫氢氧化邻连萤香胺或崭香革酸，生成有色产物，进纛再以分光光度法线荧光法检测。 在HRP的作用下，联：0：能够氧化￡．酪氨酸产生荧光二聚体¨j，丽HRP价格昂贵，且不易保存。搬 较高，而胆是致癌物质，不仅对操作者健康产生影响，而且危害环境。Tang等¨¨采用新的荧光底物 ， 成过程复杂。 ： 本实验蒯用蛊红蛋态靛过氧佬物酶穰亿活性，采蒲毛-酪氨酸(L-Tyr)作失荧光瘾物，价豢翳得、无毒 性，且被H：O：氧化后产生的二聚体荧光性能稳定。与GOD催化氧化葡萄糖的反应进行偶联，建立了 测定果蔬组织液中葡萄糖的新方法。实验采用斜率法测定，而非常用的平衡法，实时监测荧光信号和反 应过程变化。发现该法反应过程稳定，用于测定葡萄糖，线性范围宽，重复性好，具有很离的选择性和灵 敏度，适用子组成较复杂懿分析对象孛的葡萄糖含量的溅定。 2实验部分 2．1仪器与试剂 LS-55型荧光分光光度仪(英国，PerkinElmer 西城区医疗器械厂)，PH3C数字型精密酸度计(上海雷磁仪器厂)。 x 牛赢红蛋白(Hb，生化试剂，武汉市华顺生物技术有限公司)，配成l10。mol／L水溶液；￡．酪氨酸 厂)：使用前用高锰酸钾橼准溶液标定，褥其浓度为7。895mol／L，配成3．158x10“mot／L溶液，棕色瓶 2008．-05-25||雯璃；2008-06-14接受 本文系上海市重点学科建设项隧(No．B604) }E—mail：hszhuan90l@sina．eom 1344 分析化学 第36卷 U／mL 装，随用随配；葡