酶-04-J.ppt

4. Km是酶的特征性常数：在一定条件下，某种酶的Km值是恒定的 ，因而可以通过测定不同酶（特别是一组同工酶）的Km值，来判 断是否为不同的酶。 5. Km可用来判断酶的最适底物：当酶有几种不同的底物存在时， 通过测定酶在不同底物存在时的Km值，Km值最小者，即为该酶的最 适底物。 6. Vmax可用于计算酶的转换数：当酶的总浓度和最大速度已知时， 可计算出酶的转换数，即单位时间内每个酶分子催化底物转变为产 物的分子数。 [S] v 1000km 0.999V 100km 0.99V 10km 0.91V 3km 0.75V 1km 0.50V 0.33km 0.25V 0.10km 0.091V 7. 可用来确定酶活性测定时所需的底物浓度：当[S]=10 Km 时，ν= 91%Vmax，此时即为最合适的测定酶活性所需的底物浓 度。 8. km还可以推断某一代谢物在体内可能的代谢途径 丙酮酸 乳酸 乙酰CoA 乙醛 乳酸脱氢酶（1.7×10-5） 丙酮酸脱氢酶（1.3×10-3） 丙酮酸脱羧酶（1.0×10-3） 当丙酮酸浓度较低时，代谢走哪条途径决定于km最小的酶。 （四）Km和Vmax的测定 Lineweaver-Burk双倒数作图法 2. Hanes作图法 二、酶浓度对反应速度的影响 　当反应系统中底物的浓度足够大时，酶促反应速度 与酶浓度成正比，即ν=k[E]。 三、温度对反应速度的影响 一般来说，酶促反应速度随温度的增高而加快。但当温度增加达到某一 点后，由于酶蛋白的热变性作用，反应速度迅速下降，直到完全失活。酶促 反应速度随温度升高而达到一最大值时的温度就称为酶的最适温度。 温度对酶促反应速度的影响 ●酶的最适温度与实验条件有关，因而它不是酶的特征性常数。 ●低温时由于活化分子数目减少，反应速度降低，但温度升高后，酶活性又可恢复。 四、pH对反应速度的影响 观察pH对酶促反应速度的影响，通常为一“钟形”曲线，即pH过高或过低均可导 致酶催化活性的下降。 酶催化活性最高时溶液的pH值就称为酶的最适pH。 pH对酶促反应速度的影响 ●人体内大多数酶的最适pH在6.5～8.0之间。 ●酶的最适pH不是酶的特征性常数。 ●pH对酶促反应速度的影响，其原因主要是由于pH的改变导致了酶的催化基团以及底物分子的解离状态改变或者导致了酶蛋白的变性。 2.具有高度的底物特异性 一种酶只作用于一种或一类化合物，以促进 一定的化学变化，生成一定的产物，这种现象 称为酶作用的特异性。 分为结构专一性和立体异构专一性。 绝对专一性 有的酶对底物的化学结构要求非常 严格，只作用于一种底物，不作用于其它任何物质。 脲酶：H2N—C—NH2 + H2O O 2NH3 + CO2 (1) 结构专一性 概念：酶对所催化的分子（底物，Substrate）化学结构的特殊要求和选择。 类别：绝对专一性和相对专一性 相对专一性 有的酶对底物的化学结构要求比上述绝对专一性略低一些，它们能作用于一类化合物或一种化学键。 1） 键专一性 有的酶只作用于一定的键，而对键 两端的基团并无严格要求。 2）基团专一性 另一些酶，除要求作用于一定的键以外，对键两端的基团还有一定要求，往往是对其中一个基团要求严格，对另一个基团则要求不严格。 酯酶：R—C—O—R′ + H2O O RCOO- +R OH + H+ O CH2OH OH OH OH 1 5 α-葡萄糖苷酶 O R +H2O O CH2OH OH OH OH OH 1 5 + ROH 消化道内几种蛋白酶的专一性 （芳香） （硷性） （丙） 胰凝乳蛋白酶 胃蛋白酶 弹性蛋白酶 羧肽酶 胰蛋白酶 氨肽酶 羧肽酶 (2) 立体异构专一性 概念：酶除了对底物分子的化学结构有要求外，对其立体异构也有一定的要求。 类别：旋光异构专一性和几何异构专一性 3.酶的催化活性是可以调节的 许多因素可以影响或调节酶的催化活性 ，如代谢物、对酶分子的共价修饰、酶蛋白 的合成改变等。 (一) 酶作用专一性的机制 酶分子活性中心部位，一般都含有多个具有催化活 性的手性中心，这些手性中心对底物分子构型取向起 着诱导和定向的作用，使反应可以按单一方向进行。 酶能够区分对称分子中等价的潜手性基团。 二. 酶促反应的机制　　 1.“三点结合”的催化理论 认为酶与底物的结合处 至少有三个点，而