柱前衍生反相高效液相色谱法测定天花粉γ-氨基丁酸含量.pdfVIP

2008年第l7卷第2期 药物鉴定 柱前衍生反相高效液相色谱法测定天花粉中 一 氨基丁酸含量 潘 建，陈文秋，余施筱，余敏灵 (四川省乐山食品药品检验所，四川 乐山 614ooo) 摘要：目的 测定天花粉中_y一氨基丁酸的含量。方法 在碱性条件下，将氨基酸与异硫氰酸苯酯反应生成异硫氰酸苯一氨基酸的衍生物， 采用Venusil—AA氨基酸分析柱(25Omm x4．6mm，5 Ixm)，二元梯度洗脱，流动相A为0．05mol／L醋酸钠溶液(prl=6．5)，流动相B为乙 腈一水(80：20)，检测波长为248 am。结果 _y一氨基丁酸质量浓度在8．224～41．120 txg／mL范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回 收率为99．1％(n=5)。结论 该方法结果准确，重现性好。 关键词：柱前衍生；反相高效液相色谱法；天花粉；_y一氨基丁酸 中图分类号：11284．1；R282．71 文献标识码：A 文章编号：1006—4931(2008)02—0037—02 天花粉为葫芦科植物栝楼 Trichosanthes kirilowii Maxim．的干燥 花粉适量粉碎后，混匀，精密称取 表1 洗脱梯度 根，富含氨基酸…，其中所含的_y一氨基丁酸具有多种生理作用“ 】。 10．866 2 g，置离心管中，加盐酸溶液 时间( i ) 塑! 目前尚无其含量测定的相关报道。笔者采用了柱前衍生反相高效 40 mL，超声振摇10rain后，再以3 000— A B 液相色谱(RP—HPLC)法对天花粉中_y一氨基丁酸含量进行了测 5 000 r／min离心15 min，分取上清液置 定，建立了较为完善的测定方法，现报道如下。 500 mL量瓶中。残渣用30，20，10 mL 0．1 mol／L盐酸溶液按上述方法提取 美国Agilent 1100型高效液相色谱仪，包括VWD紫外检测器； 后，分取上清液，置上述量瓶中，加盐酸 Chem Station色谱工作站、Varian Caryl00型紫外可见分光光度计。 溶液至刻度，摇匀，作为供试品贮备液 _y一氨基丁酸(批号成都市科龙化工试剂厂，含量大于 (残渣用0、1 mol／L盐酸溶液按上述方 99．0％)；异硫氰酸苯酯(批号为AAD06001，北分瑞利集团)；乙腈 法提取后，照2．3项下方法衍生化后，进样检测，色谱图中无_y一氨 (上海陆都化学试剂厂，色谱纯)；其他试剂均为分析纯；天花粉按 基丁酸色谱峰)。 2005年版《中国药典(一部)》鉴定为葫芦科植物栝楼的干燥根。 2．3 样品衍生化 精密量取供试品贮备液适量(80～400 txL)，置1 mL量瓶中， 2．1 色谱条件与系统适用性试验 加异硫氰酸苯酯一乙腈溶液(25 txL：2 mL)200 txL，加三乙胺一乙 色谱柱：Venusil—AA氨基酸分析柱(250 mm x4．6 mm，5 txm)； 腈溶液(1．4：8．6)稀释至刻度，摇匀，放置1 h，转移至试管中，加正 流动相A：0．05 mol／L醋酸钠溶液(pH=6．5)；流动相B：乙腈一水 己烷1 mL，振摇，分取下层液体，滤过，取续滤液作为待测溶液。 (80：20)；流速：1．00 mL／min；检测波长：248 am；柱温：25℃；进样 2．4 检测波长选择 量：5 txL。洗脱梯度见表1。取供试品贮备液400 txL及对照品贮备 取对照品贮备液400 txL，按2．3项下方法衍生化后，取续滤