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第35卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第12期 2007年12月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1761—1766 烟叶和烟草料液中氨基酸的直接检测及碳水化合物的去除 潘媛媛 梁立娜 蔡亚岐 牟世芬 (中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室，北京100085) 摘 要 建立了高效阴离子交换色谱一积分脉冲安培法(HPAEC—IPAD)直接检测烟叶和烟草料液中氨基酸的 方法。利用离线除糖的方法，去除烟叶和烟草料液中大量干扰糖类，包括葡萄糖、果糖和蔗糖及麦芽低聚糖 等。采用AminoPac PAl0阴离子交换柱，以NaOH和NaAc的强碱性溶液为淋洗液，采用梯度洗脱，流速为 0．25 mlMmin；积分脉冲安培法对氨基酸进行检测，回收率可达76％～105％。此方法可以有效的解决烟叶、 烟草料液等含糖量高的样品中糖类化合物的干扰，对氨基酸实现灵敏、准确的定量分析。 关键词 氨基酸，高效阴离子交换色谱一积分脉冲安培检测，除糖，烟叶，烟草料液 1 引 言 氨基酸的测定一直是烟草化学分析中的重要项目。烟草中含氮化合物的含量与烟草的品质有密切 关系，直接影响其味道及烟气丰满度¨l2 J，某些游离氨基酸和卷烟内在质量有显著的相关性 j。因此， 准确检测烟叶和烟草料液中游离氨基酸的含量对评价烟草品质及优化卷烟配方设计等都具有重要意义。 目前高效液相色谱法 和柱后衍生高效阳离子交换色谱法 被广泛应用于烟草和其它样品中 氨基酸含量检测。检测前将氨基酸衍生化处理，生成能用紫外或荧光法检测的物质。这些方法往往存 在样品基体干扰衍生反应、衍生反应进行不完全、产物不稳定以及装置复杂、步骤繁琐等不足。 本研究采用高效阴离子交换色谱一积分脉冲安培检测法(HPAEC—IPAD)直接分离氨基酸，无需衍 生。方法操作方便、灵敏度高，所用试剂环境无污染，对氨基酸的检出限可达到pmol或fmol。HPAEC— IPAD法还可检测羟基，因此也可以同时检测糖。对于糖和氨基酸含量差别不大的样品，可以通过改变 淋洗液梯度实现氨基酸和糖类化合物的同时分离测定 l ”j。但如果样品中含有大量的碳水化合物，则 会干扰氨基酸的检测，必须除去。Jandik等¨ 采用在线除糖的方法实现了对胡萝卜汁样品中氨基酸的 测定。该除糖方法自动化程度高、重现性好，但要求样品中糖和氨基酸的含量比例不得超过100：1。 Ding等¨ 提出了离线除糖的方法，可以去除样品中含量达1O 倍的葡萄糖、果糖和蔗糖，此法灵活性 强、费用低。但低聚糖含量高的样品中氨基酸的电化学直接检测方法未见报道。 本研究利用离线除糖方法除去烟叶和烟草料液中的大量干扰糖类，而后用HPAEC．IPAD直接检测 氨基酸。离线方法可以除去烟叶和烟草料液中的葡萄糖、果糖和蔗糖。本研究首次将此除糖方法用于 烟草料液中麦芽低聚糖的去除。样品除糖后用AminoPac PAl0阴离子交换柱，以NaOH和NaAc的强碱 性溶液为淋洗液，对氨基酸进行检测。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 ICS 3000多功能色谱装置，包括双泵(DP)模块、检测器／色谱(DC)模块、自动进样器(AS)模块(美 国Dionex公司)。双泵模块中包含一个单元泵和一个四元梯度泵，其中四元梯度泵用于氨基酸的分析； 检测器／色谱模块中放置进样阀、分析柱和安培检测器，温度均设为3O。【=，安培检测器用金工作电极， pH-Ag／AgC1复合参比电极，钛对电极。Chromeleon 6．7色谱工作站，超纯水设备(Barnstead，IA，USA)。 18种氨基酸标准，生化级标准(上海康达生物制品有限公司)；无水醋酸钠(AAA．Direct Certified， 2007-03-3l收稿；2007-08-08接受 本文系国家自然科学基金(No和国家重点基础研究计划(“973”)(No．2003CB415001)资助项目 E-mail：caiyaqi@reees．ae．cn 1762 分析化学 第35卷 Dionex)和50％