甘露聚糖酶Man23的化学修饰及活性必需基团测定.pdfVIP

第l6卷第6期 激 光 生 物 学 报 V()1．16 No．6 2007年12月 ACTA LASER B10L0GY SINICA Dec．2007 · 基础研究 · 甘露聚糖酶Man23的化学修饰及活性必需基团测定 周海燕 ，董 蕾 ，田 梅 ，饶力群 ，吴永尧 (湖南农业大学 a．生4t；-~发酵工程实验室；b．实验室管理中心；c．生物科学技术学院，湖南长沙410128) 摘 要：用化学修饰剂NEM、二甲基溴化锍、EDC、DEPC、TNM、对硝基苯乙二醛、PMSF、TNBS对芽孢杆菌B23 产生的甘露聚糖酶Man23进行化学修饰，并测定修饰反应的动力学参数关系。结果显示半胱氨酸、色氨酸(1 个)和谷氨酸(或天冬氨酸)残基(2个)是酶活性的必需基团；组氨酸、酪氨酸、精氨酸、丝氨酸和赖氨酸残基均 为非必需基团。双向电泳结果显示酶蛋白分子具有一个链内二硫键(Cys90一Cysl10)。荧光光谱测定结果显示 该酶最大吸收峰为336 nm。底物作用导致酶的发射光谱发生蓝移，说明色氨酸残基位于酶蛋白分子内部的疏 水区。 关键词：甘露聚糖酶；化学修饰；必需基团 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1007—7146(2007)06-0717-05 The Studies on Chemical Modification and Essential Residues of Mannanase Man23 ZHOU Hai—yan ，DONG Lei“，TIAN Mei ，RAO Li—qun ，WU yong·yao (Hunan Agriculture University a．Biochemistry and Fermentation Engineering Lab；b．Lab Management Center； e．College of Bioscience and Biotechnology，Changsha 410108，Hunan，China) Abstract：The mannanase Man23 produced from Bacillus subtilis B23 was modified by NEM，Dimethyl一(2一hydroxy一5一 nitrobenzy1)一sulfonium bromide，EDC，DEPC，TNM，4-nitrophenylg1yoxa1，PMSF and TNBS．Man23 could be sup— pressed by NEM，Dimethyl—sulfonium bromide and EDC and the kinetic parameters were determined．The data indicated that cysteine residues，one tryptophan residue and two carboxyl residues might be the essential groups of Man23．The two—dimensional eleetrophoresis proved that there was a disulfide bond between Cys90 and Cysl 10 on the single chain． In the presence of ligands—binding，the kmax emission fluorescence spectrum of the Man23 changed from 336 nm to 330 nm．It appeared that tryptophan residues were involved in a h、drophobic micro—environment of mannanase Man23 mole— cule． Key words：mannanase；chemical modificati