荧光及吸收光谱法研究β-环糊精-硫堇包合物与DNA的相互作用.pdfVIP

第27卷，第12期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 Vo1．27，No．12，pp2538—2541 2 0 0 7年 1 2月 Spectroscopy and Spectral Analysis December，2007 荧光及吸收光谱法研究 环糊精一硫堇包合物与DNA的相互作用 童晓青 。，吕鉴泉¨，孙 娟 ，龚仲红 1．湖北师范学院生化分析技术湖北省重点实验室，湖北黄石 435002 2．华中师范大学化学学院，湖北武汉 430074 摘 要 用荧光及可见光谱方法研究了 环糊精对硫堇的包合以及 环糊精一硫堇包合物与DNA的相互作 用。在pH 7．2的PBS缓冲液中， 环糊精以1：1包合硫堇，包合常数为527 L·mol-1(可见光谱法)、444 L·mol (荧光法)；DNA的引入使环糊精一硫堇包合物的吸收波长红移，吸光峰强度降低；环糊精一硫堇包 合物的荧光发生蓝移并有猝灭现象，猝灭常数为6．12X 10 L·mol～。荧光及可见光谱数据表明，环糊精一 硫堇包合物以嵌入方式与DNA发生相互作用，其结合比是1：1。 关键词 相互作用；硫堇； 环糊精；包合物；DNA 中图分类号：0657．3 文献标识码：A 文章编号：1000—0593(2007)12—2538—04 小牛胸腺DNA(ct-DNA，Sigma公司)：使用前未作进一 引 言 步处理，摩尔浓度由紫外分光光度计标定，e一6 600 L· mol ·crI1 ；硫堇(Thinonine，TH，Sigma公司)； 环糊 生命科学研究中，DNA、蛋白质等生物大分子的结构与 精(／CD，Fluka公司)；其余试剂均为国产分析纯试剂，实验 生理功能是其核心内容，包括药物在内的活性分子与它们的 用水为二次蒸馏水。 相互作用成为的令人关注的前沿研究领域之一l_1 J。 1．2 实验方法 作为一种药物和活性探针，具有平面刚性芳环结构的噻 在含1．0×10 mol·L TH的0．2 mol·L pH 7．2 吩类小分子一硫堇，与DNA[3-s3、蛋白质l_6]相互作用、结构 的PBS缓冲溶液中，分别加入适量的fl-CD和ct-DNA，定 与功能等已经引起了化学家、生物学家和医学家的关 容，摇匀。紫外一可见吸收光谱研究时，以pH 7．2的PBS缓 注 ]。鉴于硫堇类药物与DNA的相互作用是在生理条件 冲液为参比测量19o～700 m 内的光吸收，荧光光谱研究 下发生的，生命体内大量存在的多糖物质可能对药物的形态 时，以550 nip_为激发波长，测量57O～750 nip_范围的荧光 有影响。因此，在生命体内生物分子具有超分子的特征，借 强度。 助于环糊精的模拟酶功能，将药物筑构成超分子体系并用于 研究它们与生物分子的作用，有可能从药物的定向释放以及 2 结果与讨论 作用机制方面获得一些新认识。 本文尝试性地用荧光及可见紫外光谱技术探讨 环糊精 2．1 环糊精对硫堇的包合 与硫堇的包合反应以及p环糊精一硫堇包合物与DNA的相互 图1为不同fl-CD浓度存在下1．0×10 mol·L- 硫堇 作用，并就作用模式及性质进行了总结。目前，该方面的研 的荧光光谱。从图可见，随fl-CD浓度的增大，硫堇的荧光强 究尚未见有文献报道。 度随之逐渐增加；当fl-CD的浓度达到3．2×10-3 mol·L 时，硫堇的荧光强度不再有明显的增强。荧光增强的原因可 1 实验部分