猪戊型肝炎病毒ⅳ型衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定-畜牧兽医学报.pdf

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１２４３６ ９５０９５５ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 猪戊型肝炎病毒 型衣壳蛋白单克隆 Ⅳ 抗体的制备与鉴定 １ ２ １ ３ １ ２ 赵菲菲 ，赵 钦 ，胡守彬 ，陈福勇 ，肖一红 ，周恩民 　 （ 山东农业大学动物科技学院免疫生物学实验室，泰安 ； 西北农林科技大学兽医免疫学研究所， １． ２７１０１８ ２． 西北农林科技大学动物医学院，杨凌 ； 中国农业大学动物医学院，北京 ） ７１２１００ ３． １００１９３ 摘 要：为获得猪戊型肝炎病毒（ ， ） 型衣壳蛋白单克隆抗体，将猪 衣壳蛋白的 端 　 ＨｅａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ ＨＥＶ Ⅳ ＨＥＶ Ｃ ｐ （ — ）个氨基酸基因序列克隆入原核表达载体 （ ），构建重组质粒 ，转化 ２６７４０８ ６７５ ｐＥＴ２８ａ＋ ｐＥＴ２８ａＯＲＦ２Ｃ 犈． （ ）感受态细胞进行诱导表达， 和 鉴定，纯化后免疫小鼠。取免疫小鼠的 犮狅犾犻Ｒｏｓｅｔｔａ ＢＬ２１ ＳＤＳＰＡＧＥ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 脾脏与鼠骨髓瘤细胞 ／ 融合制备单克隆抗体。通过间接 和竞争 方法筛选并鉴定单抗。结果表 ＳＰ２０ ＥＬＩＳＡ ＥＬＩＳＡ 明蛋白得到正确、高效表达，获得 株识别不同的抗原表位区的单克隆抗体，分别命名为 （ ）、 ３ Ｍａｂ１Ｅ４ ＩＧ１ Ｍａｂ ｇ （ ）和 （ ），其中 和 能阻断临床阳性猪血清，提示该 株单克隆抗体识别的抗原表 ２Ｃ７ ＩＧ１ Ｍａｂ２Ｇ９ ＩＧ２ｂ １Ｅ４ ２Ｇ９ ２ ｇ ｇ 位是猪 ＨＥＶⅣ型衣壳蛋白上重要的抗原表位区，而单抗 Ｍａｂ２Ｃ７不能阻断。本研究为猪 ＨＥＶⅣ型的诊断及研 究提供重要工具。 关键词：猪戊型肝炎病毒；衣壳蛋白；单克隆抗体；鉴定 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．６５９．６ Ａ ０３６６６９６４２０１２０６０９５００６ 　　　　 　　　　 犘狉犲犪狉犪狋犻狅狀犪狀犱犆犺犪狉犪犮狋犲狉犻狕犪狋犻狅狀狅犳犕狅狀狅犮犾狅狀犪犾犃狀狋犻犫狅犱犻犲狊犛犲犮犻犳犻犮犳狅狉 狆