类胡萝卜素在耐辐射奇球菌辐射抗性中的作用-生物化学与生物物理进展.PDF

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2009, 36(6): 7 15~721 胡萝卜素在耐辐射奇球菌辐射抗性中的作用* 1, 2) 3) 2) 2) 2) 1)** 杨桥 张晓玲 张 磊 代 俊 张俊祥 焦炳华 1) 2) ( 第二军医大学生物化学与分子生物学教研室，上海200433 ；病毒学国家重点实验室，武汉大学生命科学学院，武汉430072； 3) 中国水产科学研究院东海水产研究所，上海200090) 摘要 为研究耐辐射奇球菌(Deinococc us radiodurans) 中类胡萝卜素的生化合成基因及其在该细菌抗辐射机制中的生物学作用， 通过有机溶剂提取及LC-MS 技术分析了D. radiodurans 所产类胡萝 卜素物质的主要组分，运用PCR 及基因同源重组技术， 对该菌中类胡萝 卜素生化合成途径的八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase，crtB) 及八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase，crtI)基因进行了缺失突变，通过表型观察及HPLC 定量分析突变株所产类胡萝 卜素的组分变化确证突变株构建成 功 野生株及 与 基因缺 突变株对电离辐射和H O 的敏感性差异比较分析显示，和野生株相比，两种突变株对不 crtB crtI 2 2 同剂量电离辐射和不同浓度H O 的敏感性更强 及 基因功能研究表明，这两个关键性合成基因的缺 ，导致突变 2 2 crtB crtI 株不能催化合成类胡萝卜素生化合成途径中的重要中间体—— —番茄红素及一系列下游产物 通过 原噬菌体紫外线诱导系 统、电子自旋共振(ESR)及DMPO 自旋捕集技术，分别在体内和体外评价了其类胡萝 卜素的抗氧化能力 结果表明，两种类 · 胡萝卜素对超氧阴离子(O )及羟自由基( ·OH)均表现出较强的清除作用 上述研究结果为探究D. radiodurans 的类胡萝卜素合 2 成基因和生物学功能，及类胡萝卜素在D. radiodurans 抗辐射机制中的作用提供了新的直接实验证据 关键词 耐辐射奇球菌，类胡萝卜素，抗辐射，自由基 学科分类号 Q93 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2008.00689 耐辐射奇球菌Deinococcus radiodurans 属异常 机制[7, 8] 国内外学者的研究工作大多侧重于其 球菌科(Deinococcaceae)异常球菌属(Deinococcus)， DNA 修复基因和修复蛋白质方面 值得注意的是， 该菌对电离辐射(存活最高剂量约 15 kGy，抗性是 该菌因可产生类胡萝 卜素物质而菌体呈红色，而类 普通真核生物的 1 000 倍)、紫外线、干燥、强氧 胡萝 卜素是一类多功能的生物活性分子，是优良的 [1, 2] [3] 化剂和某些化学诱变剂显示超乎寻常的抗性 自由基清除剂和抗氧化剂 目前，关于类胡萝卜 双链断裂(double strand breaks ，DSB)可导致基因组 素在D. radioduran 超强抗辐射中的作用机制的研究 上某段基因的缺 ，从而导致一些重要遗传信息的 工作还鲜有报道[9