高特异性抗桔霉素单克隆抗体的制备及鉴定-生物化学与生物物理进展.pdf

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2010, 37(11): 1248~ 1253 高特异性抗桔霉素单克隆抗体的制备及鉴定* 1) 2) 1) 1, 2)** 李泳宁 汪媛媛 郑允权 郭养浩 1) 2) ( 福州大学化学化工学院，福州350002 ； 建省医疗器械与医药技术重点实验室，福州350002) 摘要 以1, 4- 丁二醇二缩水甘油醚(双环氧试剂)为偶联剂，合成桔霉素- 蛋白偶联抗原CIT-BSA，将偶联抗原免疫BALB/C 小鼠，取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0 进行融合，应用有限稀释法进行筛选，经过克隆化后筛选到一株稳定分泌抗桔霉素 抗体的杂交瘤细胞株H2-F8 8 该单克隆抗体经过初步鉴定，抗体类 为IgM 类，抗体的相对亲和力为4.17 10 L/mol，单抗 与黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A 、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮等毒素的交叉反应率均低于0.1%，与红曲色素中的 橙色素和红色素的交叉反应率均低于0.01% 在此基础上建立了间接竞争ELISA 检测方法，线性范围为0.05～1.0 滋g/L ，IC50 值为0.3 滋g/L 结果为快速检测桔霉素的酶联免疫检测方法的建立和检测试剂盒的研制提供技术依据 关键词 1, 4- 丁二醇二缩水甘油醚，桔霉素，单克隆抗体 学科分类号 R446.6，R392.12，Q513 DOI: 10.3724/SP.J.1206.20 10.00026 桔霉素(Citrinin, CIT)是由青霉菌属和曲霉菌属 杂交瘤细胞技术建立了抗桔霉素单克隆抗体的杂交 [1] 的某些菌株产生的真菌毒素 ，分子式为C H O ， 瘤细胞株，并对单克隆抗体进行了初步鉴定，建立 13 14 5 相对分子质量为250.2，是小分子半抗原物质 了桔霉素的ELISA 检测方法 该方法具有快速、 年来的调查研究发现：在许多农产品如玉米、大 灵敏和高特异性等优点，适用于大量样品的筛选， 米、苹果、梨和果汁等食品和农产品中都有可能检 为进一步开发具有我国自主知识产权的快速检测试 [2] 测到桔霉素 ，由于桔霉素具有严重的致畸、致癌 剂盒奠定了基础 和诱发基因突变等作用，人和动物食用含桔霉素的 1 材料与方法 [3] 食物后会造成肝肾损伤 ，因此桔霉素引起的污染 问题越来越受到人们的关注 1.1 材料 桔霉素的分析检测方法主要有酶联免疫吸附法 1.1.1 试剂 桔霉素(Citrinin，CIT) ， 氏佐剂购 (ELISA) [4] 、薄层层析法(TLC)[5] 和高效液相色谱法 自Sigma 公司；牛血清白蛋白(BSA) 为Solarbio 公 (HPLC)[6]等 酶联免疫检测法具有特异性强、灵敏 司产品；卵清蛋白(OVA)为Worthington 公司产品； 度高、检测时间短等特点，被广泛应用于各种霉菌