包心芥菜多糖的分离纯化及理化性质分析.pdfVIP

第29卷 第2期 华 侨 大 学 学 报 (自然 科 学 版 ) Vol_29 NO．2 2008年4月 Journal of Huaqiao University(Natural Science) Apr．2008 文章编号： 1000—5013(2008)02—0273—03 包心芥菜多糖的分离纯化及理化性质分析 蔡婀娜，李夏兰，魏国栋 (华侨大学 材料科学与工程学院，福建 泉州362021) 摘要： 研究包心芥菜多糖的提取、分离和纯化技术，并对得到的多糖进行初步的鉴定．经醋酸纤维薄膜电泳 和高效液相色谱分析证明，所得到的包心芥菜多糖WLP一2为纯品，不含蛋白质、核酸，为非淀粉类均一多糖， 其相对分子质量为433048．WLP一2完全酸水解后，经高效液相色谱分析确定其糖基的组成为鼠李糖(Rha)、 木糖(Xy1)、阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖(Glc)和半乳糖(GaD，摩尔比为3．21：l_O0：l_66：l_9O：4．O3． 关键词： 包心芥菜；多糖；纯化；理化性质 中图分类号： Q 539：S 631 文献标识码： A 包心芥菜具有抗癌、清热、利尿、养胃、解毒、降压、降脂等功能 ，这些可能与其中的多糖有关．哈 森其木格等 曾对芥菜多糖进行过初步研究，没有得到芥菜多糖纯品．国外还未见芥菜(Brassica jun— tea)多糖的研究报道．本文用热水提取芥菜，得到了其中的非淀粉类多糖，经过分离纯化，得到了其中的 主要组分WLP一2，并对其进行了理化性质分析． 1 实验部分 1．1 材料与仪器 (1)材料．包心芥菜(市购)；DEAE—Sepharose CL一6B和葡聚糖Dextran相对分子质量标准品(瑞 典Pharmacia公司)，其他试剂为分析纯，市售． (2)仪器．SP一2102UV型单光束紫~1-／可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)，DKZ一2型电热恒 温振荡水槽(上海精宏仪器有限公司)，N一1000型旋转蒸发仪(东京理化公司)，4K15型高速冷冻离心机 (德国Sigma公司)，MC99—3型自动液相色谱分离层析仪(上海沪西分析仪器厂)，1100型高效液相色谱 仪(美国Agilent公司)，Shodex Sugar KS一804不锈钢色谱柱(8．0 mm×300 mm，日本昭光通商(一k海) 有限公司)，ZORBAX Carbohydrate柱(250 mm×4．6 mm，美国Agilent公司)，UV一2401PC型紫外光 谱仪(日本岛津公司)，FTIR 2000型红外光谱仪(美国PerkinElmer公司)，EC135—90型电泳仪(美国 Thermo公司)． 1．2 实验方法 ‘ 1．2．1 热水提取 称取100 g包心芥菜干品，加入4 L蒸馏水，于90℃热水恒温提取120 min．提取结 束后用4层纱布过滤，于离心机(4 000 r·min )离心 10 min，取上层清液测定多糖质量浓度．旋转蒸 发浓缩上层清液至原体积的1／8～1／10，加入体积分数为95 的乙醇至溶液的乙醇体积数为55 ，置 于4℃冰箱中醇析3 h后，于离心机(6 000 r·min )上离心15 min，沉淀依次用无水乙醇和丙酮洗涤 3次，真空干燥，即得到包心芥菜多糖粗品WLCP． 1．2．2 碱提多糖的分离纯化 称取3 g的WLCP粗多糖，加入 50 mL的蒸馏水，微热搅拌，待多糖充 分溶解后，在20℃条件下于离心机(9 000 r·min )上离心20 min．取上层清液于流水中透析48 h．直 至多糖溶液中已经不含还原糖．在蒸馏水中继续透析24 h，每8 h换一次水，透析完后旋转蒸发至原来 收稿日期： 2007—10—28 作者简介： 蔡婀娜(1962一)，女，实验师，主要从事生化分离技术的研究．E—mail：ana@hqu．edu．cn． 基金项目： 泉州市科技计划项目(2007N03) 274 华 侨 大 学 学 报 (自然科 学 版) 体积的1／3左右，离心(9 000 r·rain-1)30 rain得样品．样品上1．6 cm×50 cm的DE