缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织水通道蛋白9实验研.docVIP

　　缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织水通道蛋白9实验研 【摘要】 目的 研究缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后水通道蛋白9(AQP9)在脑组织中的表达变化规律,初步探讨AQP9与脑水肿的关系。方法 采用HIBD动物模型,实施定量PCR(基因水平)和ethods HIBD animal model ine the changes of AQP9 expression and AQP9 mRNA.Results AQP9 expression had no obvious change in the control group，but in the HIBD group,AQP9 expression increased e of ischemia,and it reached its highest level on the second and third day of ischemia.Conclusions In hypoxicischemic brain damage,AQP9 expression increases e of hypoxia and ischemia,and it reaches its highest level at 72 hours. 　　【Key age/pathology; Cerebral ischemia; Cerebral hypoxia; Cerebral edema; AQP9; Rats; Animal，experiment 　　缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后,大脑组织将发生一系列的病理生理变化。其中能量代谢变化和水电解质平衡的紊乱始终贯穿于HIBD。研究表明,水通道蛋白9(aquaporin9,AQP9)与大脑的能量代谢和水电解质平衡密切相关[1]。因此研究HIBD后AQP9的表达,探索其在HIBD不同时间段的变化规律,有望能为进一步阐明HIBD后脑水肿的病理生理机制提供实验依据,并为临床治疗提供新思路。本文通过对新生鼠HIBD模型AQP9与脑水肿关系的研究旨在为今后治疗脑水肿开辟新的途径。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验动物 200906/08取健康7日龄SD新生大鼠共40只，体质量在12～18 g,雌雄不限,由哈尔滨医科大学附属二院动物中心提供(动物合格证号：黑动字D。采用随机数字表法分为对照组和HIBD模型组各20只。所有动物均按照国家实验动物饲养和使用指南,动物饲养在实验室,室温稳定在20 ℃,12 h明暗交替。 　　1.2 标本取材实验材料及设备 外科手术器械一套，操作台，绑鼠板，无影灯，台灯(60 emPER(89826)。MMLV逆转录试剂盒:Promega Cat#A3500(100个反应)。 　　AQP9引物上游序列:5′TTG GAC CAT CAT AGG CGC3′,下游序列:5′GCA TGT GAT CGA CAT TGA CC3′,扩增片段长698 bp,TRIZOL Reagent(美国Invitrogen公司)，0.2 mL PCR管,0.5、1.5 mL离心管,10、200、1 000 μL吸头(美国Axygen公司)3 mL匀浆器，氯仿(三氯甲烷)，异丙醇,75%无水乙醇(DEPC水配制)。 　　核酸蛋白检测仪(德国Eppendorf公司)，Himac CF16RX低温冷冻高速离心机(日本HITACHI公司)，Gilson和Dragon微量加样枪0.2～1 000 μL,荧光定量PCR仪LightCycler 2.0(德国Roche公司)，超纯水系统(Sartofus公司,德国)，垂直电泳和转膜系统(BioRad公司,美国)，恒温循环水浴箱，电子天平(Sartorius公司,德国)，Forma -80 ℃低温冰箱(Forma公司,美国)，西门子-20 ℃冰箱(sietnens公司,德国),Eppendorf5415D微型离心机(Eppendorf公司,德国)，Vortex2振荡器(sI公司,美国)。 　　1.4 实验方法 　　1.4.1 HIBD动物模型的建立 新生鼠乙醚吸入作为基础麻醉,消毒皮肤,2%盐酸普鲁卡因颈部局部麻醉;切开皮肤及皮下组织,分离左侧颈总动脉,并用70号灭菌丝线双线结扎;置鼠于常氧空气中30 min后,放进含8% O2和92% N2混合气体的低氧舱,流量为2 L/min,处理3 h,环境温度为34 ℃,湿度为85%，低氧处理结束后的新生鼠放回含常氧的母鼠笼中饲养1 h,模型建成;对照组仅行假手术,不予颈总动脉结扎和缺氧。两组均于HIBD模型制成后6、24、48、72 h分别处死动物(各时间点动物5只),断头取新生鼠左脑，置于液氮中保存。 　　1.4.2 RTPCR分析(实时定量PC