骨髓间充质干细胞治疗脑梗死的研究进展.docVIP

　　骨髓间充质干细胞治疗脑梗死的研究进展 【关键词】 骨髓间充质干细胞；脑梗死；诱导分化 脑梗死是神经系统的常见病、多发病，病死率、致残率高，且极易复发［1］。目前临床对脑梗死的治疗尚缺乏有效的手段，寻找一种能从组织结构及功能上修复坏死神经元的种子细胞意义重大。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)是一类存在于骨髓网状间质内的非造血干细胞，具有高度的自我复制能力和多向分化潜能，在适当的诱导条件下可分化成多种细胞［2］。随着BMSCs的体外培养成功、分离纯化、建立细胞系及定向诱导分化等技术的成熟，作为一种良好的种子细胞日益成为有关专家关注的焦点，与此同时它也为脑梗死患者的治疗提供了新的思路［3］。国内外有关骨髓间充质干细胞治疗脑梗死的研究取得了一定进展，现结合相关文献作一综述。 1 骨髓间充质干细胞的生物学特性 间充质干细胞首先在骨髓中发现，是一类于中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞。大量的体外实验证明，在不同诱导条件下，间充质干细胞不仅可以向多种中胚层的组织细胞分化，如成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞等，还可以向外胚层和内胚层的神经元样细胞和肝细胞样细胞分化［4～6］。 迄今为止，BMSCs的表面标志尚未确定，利用流式细胞仪观察到的结果显示BMSCs的表面抗原具有非专一性，它表达间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志，而不表达造血干细胞的表面标志。BMSCs对SH2、SH3、SH4、CD29、CD44、CD71、CD90、CD105、CD166等抗体呈阳性反应，对CD11b、CD14、CD31、CD34、CD45、CD133等则呈阴性［7～9］。其中SH2、SH3、SH4随着干细胞的分化而消失，具备一定的特异性。 2 骨髓间充质干细胞神经分化潜能的研究 国内外大量研究表明，BMSCs在体外、体内特定条件下可诱导分化为神经样细胞，这为其移植治疗脑梗死提供了理论前提。 2000年，SCs 在体外培养繁殖20 多代，用β巯基乙醇诱导，结果显示其表达神经元特异性烯醇化酶(neuronspecific enolase，NSE)、N乙酰神经氨酸（NeuN）、神经微丝蛋白（neurofilamentM，NFM）和氨基乙磺酸(tau)，在相同条件处理下人BMSCs 也可以分化成神经元。2001年Guo等［11］发现使用高度浓缩的2巯基乙醇能够诱导BMSCs分化成神经元样的细胞，分化后的细胞可以表达NF和NSE，这些神经元样细胞的碱性磷酸酶检测呈阳性，而其他未分化的干细胞则是阴性的，利用甲苯胺蓝涂染已分化的细胞未发现尼氏小体，说明这些细胞并不属于神经元谱系。2003年Hou等［12］将绿色荧光蛋白标记的成人BMSCs移植入帕金森模型大鼠体内，发现标记细胞生存时间超过70 d，在大鼠脑内的纹状体、胼胝体、对侧皮质甚至脑动脉血管壁都检测到标记细胞的存在，免疫细胞化学方法显示这些移植的标记细胞表达NF、NSE和神经胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acid protein，GFAP)。Joannides等［13］于2003年在海马星形胶质细胞的条件培养基中加入表皮生长因子和成纤维细胞生长因子可以极大地促进BMSCs向神经方向分化［13］。2004年，Tondreau等［14］利用FACS得到纯化的BMSCs并用一系列的抗体SH2、SH3、CD14、CD33、CD34、CD45等对其进行了筛选和鉴定，他们进而通过流式细胞术和RTPCR显示其向神经元方向诱导分化后的结果，证明细胞表达Nestin、TujI、betaIII Tubulin、tyrosine hydroxylase(TH)、MAP2和GFAP等。在细胞分化过程中持续表达未成熟神经元和神经胶质细胞蛋白Nestin、TujI，而细胞传了五代以后则开始较多表达成熟神经元和神经胶质细胞蛋白TH、MAP2和GFAP。同样，在2005年Long等做了类似的研究，结果表明在成神经细胞培养基中加入多种脑源性神经营养因子hEGF、bFGF、dbcAMP、IBMX、BDNF和bFGF8可以直接诱导BMSCs分化成神经样细胞。2006年Mareschi等［15］比较了几种条件培养基的神经分化效果：最低条件培养基/β巯基乙醇，最低条件培养基/维甲酸，最低条件培养基/二甲基亚砜（DMSO）+β丁羟基茴香醚。他们发现在β巯基乙醇组，分化细胞免疫表达NeuN、NSE、GFAP、Nestin，而其他两组只有NSE和Neun两蛋白表达阳性。 3 骨髓间充质干细胞移植治疗脑梗死的研究进展 已有大量报道说静脉注射BMSCs可以明显改善脑梗死的局部血流，促进神经功能的改建，改善