黄芪对培养心肌细胞过氧化氢损伤的保护作用.docVIP

　　黄芪对培养心肌细胞过氧化氢损伤的保护作用 【关键词】 过氧化氢 　　【Abstract】 AIM: To investigate the protective effects of Astragalus (AS) on cardiomyocytes against hydrogen peroxide (H2O2)induced injury. METHODS: Cultured neonatal cardiomyocytes al group; ② H2O2 group, in mol/L） for 1 h; ③ AS+ H2O2 group, in g/mL）30 min before H2O2 treatment. Colorimetric assay itochondrion activity, lactate dehydrogenase (LDH) activity, superoxide dismutase (SOD) activity and malonaldehyde (MDA) content. RESULTS: After treatment itochondrion activity al group al group. SA pretreatment markedly increased the mitochondrion activity to 0.50±0.05 and reduced LDH activity to （16.4±1.8）μkat/L. Cells treated ol/L pared al cells. Cells of SA+H2O2 group had a higher SOD activity of （331±40）μkat/L and a lool/L pared yocytes from H2O2 injury by improving cell antioxidant ability. 　　【Keyembranaceus, myocardium/cytology; hydrogen peroxide 　　【摘要】 目的： 探讨中药黄芪（Astragalus， AS）对培养的心肌细胞氧化性损伤的保护作用及其机制. 方法： 体外培养的新生大鼠心肌细胞，分为3组： ① 对照组（Normal组）；② H2O2组： H2O2 （0.2 mmol/L）与心肌细胞共育1 h；③ 黄芪+H2O2组： 黄芪处理心肌细胞30 min后，加入H2O2与心肌细胞共育1 h. 心肌细胞损伤以细胞线粒体活性和乳酸脱氢酶（LDH）活性来表示，同时检测心肌细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量，均以比色法检测. 结果： H2O2处理细胞后可使细胞LDH活性显著增高（27±3） μkat/L，细胞线粒体活性明显下降0.36±0.04，SOD 活性较正常细胞显著下降（231±22）μkat/L，MDA含量显著增高（16±3）μmol/L. 黄芪处理细胞后可显著提高心肌细胞线粒体活性0.50±0.05，降低LDH活性（16.4±1.8） μkat/L；并提高细胞抗氧化能力，表现为较H2O2处理组，SOD活性增高（331±40） μkat/L，MDA含量下降（10.7±2.4）μmol/L. 结论： 黄芪可对抗H2O2对心肌细胞的损伤，其机制与提高心肌细胞抗氧化损伤能力有关. 　　【关键词】 黄芪；心肌/细胞学；过氧化氢 　　0引言 　　黄芪（Astragalus，AS）自古以来就被《神农本草经》列为上品，它含有多糖、甙、黄酮和微量元素等多种成分，近来的研究表明黄芪对肾病、心脑血管疾病和免疫系统疾病均有较好的疗效，尤其广泛用于心肌缺血时的辅助治疗，但其作用机制尚不明确. 心肌缺血再灌注是治疗缺血性心脏时不可避免的损伤，其中氧化自由基损伤是一个主要的原因. 本实验中我们以体外培养的大鼠乳鼠心肌细胞为基础，以过氧化氢造成氧化自由基损伤模型［1］，观察黄芪处理细胞后对H2O2损伤的抵抗作用. 　　1材料和方法 　　1．1材料 　　1～3 d龄新生SD大鼠仔鼠购于第四军医大学实验动物中心. 四甲基偶氮唑蓝（MTT）购于Sigma公司. 黄芪注射液（2 g/mL， 970806）购于上海福达制药有限公司. 胎牛血清、高糖Dulbecco 最低必需培养液（DMEM）购于Hyclone公司. LDH, SOD, MDA检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所. 　　1．2方法 　　1.2.1心肌细胞培养取1～3 d SD仔鼠，在其剑突下剪开十字切口，取下心脏，磷酸缓冲液（PBS）冲洗后，将心肌组织剪碎经1 g/L胶原酶消化，收集消化后的悬液，加入少量含100 mL/L胎牛血清（FCS