黒腹果蝇黑条体突变型蛋白质组分析中二维凝胶电泳技术的改进.pdfVIP

第 28卷 湖北师范学院学报 (自然科学版 ) Vo l128 第 4 期 J ou rn al o f Hub ei N orm a l U n ive rsity (N atu ra l Sc ien ce) No 14 , 2008 黒 腹 果 蝇 黑 条 体 突 变 型 蛋 白 质 组 分 析 中 二 维 凝 胶 电 泳 技 术 的 改 进 1, 2 3 1 1 严镇钧 , 徐玲花 , 曾庆韬 , 金珊 ( 1 湖北大学 生命科学学院 ,湖北 武汉 　430062; 2 湖北师范学院 生命科学学院 ,湖北 黄石 　 4350 02; 3 黄石理工学院化学与材料工程学院 ,湖北 黄石 435000 ) 摘要 :用黒腹果蝇黑条体 突变 型为材料 ,介绍一种 改进的蛋白质 组分析 中的二维凝胶 电泳技术 。该方法在 电解质的配比以及银染过程等方面对传统的二维凝胶 电泳技术加以了改进 ,不仅缩短了实验时间 ,减轻了 实验工作量 ,而且得到了更好 的实验效果 ;并且该方法对 实验条件要求 不高 ,在普 通的实验室条件 下即可 被运用 。 关键词 :果蝇 ;黑条体 ;蛋白质组 ;二维凝胶 电泳 中图分类号 : Q349 + 53　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 100922714 (2 008) 04 200 89204 　　随着人类基 因组计划 的实施和推进 ,生命科学研究已进入了后基 因组时代 。在这个时代 ,生命科 学的主要研究对象是功能基 因组学 ,包括结构基 因组研究和蛋白质组研究等 。现在 ,蛋 白质组学研究 已被列为六大研究热点之一 ,其 “热度 ”仅次于干细胞研究 , 名列第二 ,可 以预见 ,生命科学领域 内一 个崭新的时代 - 蛋 白质组学时代即将开始 。二维凝胶 电泳技术是蛋 白质组学研究中常用的蛋 白质分 离技术 ,为蛋白质组学研究的展开提供 了一条有力的途径 。二维凝胶 电泳是根据蛋 白质 的两种性质即 等电点和分子量对蛋白质进行分离的 ,蛋白质分离胶 的染色一般用两种方法 :考马斯亮蓝染色 ,其灵 敏度为 50 - 100ng,而银染 ,其灵敏度可达到 1n g甚至更低 , 因此银染是对二维凝胶 电泳结果进行精确 分析 的重要染色方法 。 果蝇作为一种很重要的模式动物 ,其蛋 白质 的表达方式和存在形式有一定的代表性 ,利用二维凝 胶电泳技术对果蝇蛋白质进行研究的工作比较多 。例如用二维凝胶 图谱 的方法分析黑腹果蝇三龄幼 虫的血淋 巴凝块的蛋白质组 [ 1 ] ,这种高效的蛋 白质分离方法 ,对果蝇蛋白质组 的研究有很大 的推动 作用 ;用二维凝胶电泳技术分析 D elegan s单雌系果蝇全蛋白 ,这一实验探索出了适合果蝇全蛋白质 分离的二维凝胶电泳技术 [ 2 ] 。 ( ) 实验操作步骤繁琐 ,对实验条件要求高 ,难以得到分散较好 的蛋 白 肽 点 ,结果可重复性不高 , 是 目前二维凝胶电泳技术所面临的 、极大地阻碍该技术被更广泛运用 的一些困难 。我们用黒腹果蝇黑 条体突变型为材料 ,参考前人 的研究成果 ,通过不断的摸索和分析总结 , 对二维凝胶电泳技术进行 了 一些改进 ,得到了更为理想的结果 。 1　材料与方法 1 1　材料 黑腹果蝇黑条体突变型 , 25 目 (7 10μm ) Φ35 cm ～ 40 cm 非金属筛子 (也可用相当大小 内径 、底部 收稿 日期 : 2008—05 —26 ( ) 作者简介 : 严镇钧 1976 —　 ,男 ,湖北武汉人 ,助教 ,研究方向为动物遗传学 通讯作者 : 金 　珊 ( 1965 —　) ,女 ,北京人 ,副教授 ,研究方向为动物遗传学 1