黄杆菌肝素酶I基因的克隆与表达.pdfVIP

食 品与药品 Food an d Drug 2008 年第 10 卷第 07 期 5 ·论 　 著 · 黄杆菌肝素酶 I 基因的克隆与表达 傅文彬 1 ，熊可强 1 ，阚梦元 1 ，赵 健 1 * ，李素霞 1 ，姬胜利 2 ，袁勤生 1 （1. 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237；2. 山东大学药学院，山东 济南 250012 ） 摘 要： 目的 克隆并表 达黄 杆菌肝素 酶 I （He p I ）基因 。方法 通过 P CR 从黄 杆菌基因组 DNA 中扩增 黄杆 菌 He p I 基 因，验证 后插 入到表 达质 粒 p ET- 2 2 b 中构建表达 载体，重组 质粒 转化 大肠 杆菌 L2 1 ( DE 3) 进行 蛋 白质表 达，并 用 Az u r e A法测 定酶活 性。结果 PCR 扩增 得到序 列正确的 He p I 基 因，并将该基因成 功插 入到 p ET- 22b 表达载 体 中 。重组 质粒 转入 E. c o l i L2 1( DE3 ) 后表达的蛋 白质经 SDS- PAGE 分析 ，与 目的蛋 白质 的相 对分子 质量 基本 一致 ， 其 活 性约为 50 U/ LA 。结论 克隆并成功表达了黄杆 菌He p I 基 因 。 60 0 关键 词：肝 素酶 I ；克 隆 ；基 因表 达；酶 活 性 中 图分类号：Q557 文献标识码：A 文章编号：1672- 979X( 20 0 8) 07- 0 005- 03 Cl oni ng and Expr e ss i on of Fl avobact er i umhepar i numHepar i na se I Gene * FU Wen- bin, XI ONG Ke- qi ang, KAN Meng- yuan, ZHAO Ji an , LI Su- xi a, J I Sheng- l i , YUAN Qi n-sheng ( 1. St at e Key Labor at ory of i oreact or Engi neeri ng, East China Univer si t y of Sci ence and Technol ogy, Shang- hai 200237, China; 2. School of Phar maceut i cal Sci ences , Shandong Uni ver si t y, Ji nan 250012, China) Abst r act ：Obj ec t i ve To cl one and expres s t he hepar i nase I gene f romFl avobact er i umhepar i num. Me t hods The hepar i nase I gene was ampl i f i ed wi t h PCR f r omt he genomi c DNAof Fl avobact er i umhepar inum, and i t was l i nked i nt o t he expres si on pl asmi d pET- 22b af t er sequenci ng, t hen, t he r ecombinant pl asmi d was expres sed in E. col i L21 ( DE3) and t he enzyme act i vit y of r ecombi