粘质沙雷氏菌脂肪酶发酵优化论文.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四次奎国发酵工程学术讨论套论文集 粘质沙雷氏菌脂肪酶发酵优化 龙章德，潘江，许建和 (华东理工大学生物反应嚣工程国家重点宴验室，上侮200237) 摘要：对牯质沙雷氏苗产胞外脂肪酶进行了发酵产酶优化。在描瓶培养中对发酵培养基 组分进行优化，以糊精为碳霖，牛内膏和硫破铵为氟源，吐温一80作为诱导剂兢果最佳．提 高吐湿--80的浓度，脂肪辟产量显著提高。将吐温浓度由0提高到10 g／L，脂肪癣产量由 240U／L提高到3340U／L。吐温浓度为10g／L时．脂肪酶比活最商，约640 u／g细胞干重。 当摇瓶的装液量由20％降1匠到10％。酶的产量大幅度增长．提高摇床转速也能促进脂肪酶 生产，尽管细胞生长壁轻截抑幸I，结呆表明氧供应能力的提高是脂肪碎产量上升的重要因 素。在5L发酵罐中进行了脂肪酶发酵生产，吐温--80浓庹限定为2．0g／L，I；c避免发酵过 程中严重产泡．通过控制搅拌转速维持培养液的溶氧浓度不低于20％，发现将通气速事由 0．5”m提高刊1．0vvm可获得较高的酶产量，选11。060U／L． 昌皂键词：牯质涉冒氏菌；脂肪酶；发酵}优化 引 言 脂肪酶(Lipase，EC3．1．1．3)，全称为三酰基甘油酰基水解酶，在自然界广泛分布， 比如动物肝脏、植物种子以及微生物中，都有其存在。脂肪酶广泛应用于食品、医药、精 细化学品，表面活性剂以及废水处理工业中口_3]．脂肪酶也是有机合成中应用最广泛的 酶，能化学选择性、区域选择性或立体选择性地催化羧酸酯的水解或在有机溶剂中催化 酯的合成或转酯化反应n_7]。微生物脂肪酶具有较高的催化活力和稳定性，并且可以通 过微生物发酵大量获得，广泛应用于生物化工行业。 我们实验室通过定向筛选，获得一株粘质沙雷氏菌ECU1010．该菌所产的胞外脂肪 酶能催化消旋对甲氧苯基缩水甘油酸甲酯[(土)一MPGM]的对映选择性水解拆分，E值 成的重要中间体o_1“。吐温一80(聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)是一个非离子表面活性 剂，在某些脂肪酶发酵中可作为碳源o“圳。在先前的研究中，发现吐温--80有益于粘质 沙雷氏菌ECU1010脂肪酶的发酵生产[B】。但是大量的吐温一80导致发酵过程中急剧 产泡，难以控制；并且菌体对初始堵养基中添加的吐温--80利用缓慢，发酵结束后培养基 中残留的大量吐温--80给脂肪酶下游应用带来困难。在本文工作中，以低浓度吐温一80 作为产酶诱导荆，在摇瓶中对培养基碳氮源组分进行了优化，并进一步在5一L发酵罐中 考察了氧气供应对粘质沙雷氏菌发酵产酶的影响。 1材料与方法 1．1菌种、培养基和培养条件 第四次全国发酵工程学术讨论会 粘质沙雷氏菌ECU1010是一株革兰氏阴性菌，现在保存于中国普通微生物保藏中 心，序列号为CGMCC1219。实验室菌种保藏于4℃，琼脂斜面上。 种子培养基：蛋白胨10g／L、酵母膏5 0．5 0．5 o．Ol g／L，灭菌前用 g／L、NaClg／L、MgSn·7HzOg／L以及FeSOt·7H20 NaOH调节pH为7．0。 琼脂斜面培养基：与种子培养基相同，另外添加20g／L琼脂。 发酵培养基：含有与种子培养基相同的无机盐组分以及其它碳氮源组分．将在相关 部分予以具体描述。 1．2摇瓶培养 取一环斜面菌种，接种到盛有30m1种子培养基的250ml摇瓶中，在30℃和150 rpm振摇培养12h后，转接到发酵培养基中。摇瓶发酵培养用250ml摇瓶进行，按培养 基2．5％(v／v)的接种量接种，随后在30℃和150rpm振摇培养，每隔4h取样检测。样 品在40，10，000’g离心15min，取上清酶液进行分析。 1．3 5--L发酵罐分