紫外光谱法研究羟脯氨酸环二肽与DNA的相互作用论文.pdfVIP

第44卷专辑 西北师范大学学报(自然科学版) 497 紫外光谱法研究羟脯氨酸环二肽与DNA的相互作用 卢奎1，孙，武晓1，马丽1，孙艳亭1 1河南工业大学 化学化工学院，郑州(450001) 2河南工程学院，郑州(451191) 摘要：通过紫外光谱法研究了羟脯氨酸环二肽与小牛胸腺DNA在近似生理条件下的相 互作用，考察了羟脯氨酸环二肽浓度、磷酸根离子浓度等因素对羟脯氨酸环二肽与小牛胸 腺DNA的相互作用的影响，并对二者问可能的作用模式进行了推测． 关键词：羟脯氨酸；寡肽；紫外光谱 环肽及其类似物具有多种多样的生物学功能，通过分离纯化可将很多存在于人体和动 物体内的活性多肽类物质开发为药物。而DNA是生物体内的重要组成物质，是遗传信息 的主要载体，在生物遗传过程中起决定性控制作用。研究DNA与寡肽小分子相互作用的 规律，对于研究设计新药、筛选药物等都具有十分重要指导意义【f2I。本课题组已成功合成 分离出羟脯氨酸环二肽134j，本文在此基础上利用紫外光谱法研究羟脯氨酸环二肽与DNA 的相互作用。 1．实验部分 1．1仪器和试剂 磷酸盐缓冲溶液，其它试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。 1．2实验方法 a羟脯氨酸环二肽浓度对其与DNA相互作用的影响： 于10 mol·L．‘，一 mL比色管中标准加入相同体积的CT-DNA溶液，c∞DNA．5．12×10．3 定量的羟脯氨酸环二肽溶液，其加入量以一系列Rt(Rt=ccycl铲蝴烀嘲√cDNA)值确定，用磷 h后，冷却至室温，测定 酸盐缓冲溶液(pH=7．0)稀释至刻度，混合均匀，37℃下放置2 其紫外吸收光谱。 b磷酸根离子浓度对羟脯氨酸环二肽与小牛胸腺DNA相互作用的影响： 于一系列lOmL比色管中标准加入相同体积的CT．DNA溶液和羟脯氨酸环二肽溶液 下放置30 min后，测定其紫外吸收光谱。 2．结果与讨论 2．1羟脯氨酸环二肽浓度对其与DNA相互作用的影响 吲定DNA的浓度，扫描不同比例羟脯氨酸环二肽与CT．DNA作用的吸收光谱(见图 498 全国第十四届大环化学暨第六届超分子化学学术研讨会论文专辑 1)，图中a至f依次对应的Rt值为：0、0．5、l、2、5、10。如图1所示，随着羟脯氨酸环 二肽浓度的增加，羟脯氨酸环二肽与DNA相互作用的紫外光谱呈现出越来越明显的减色 效应。增色效应和减色效应是DNA特有的与其双螺旋结构密切相关的光谱性质‘51。当 CT-DNA与羟脯氨酸环二肽的摩尔比为1：2时，吸光度值降至最低，摩尔比为1：5、1：lO时 吸光度又有所增加，但与DNA谱图对照相比始终表现为减色效应。 ^bs 渡长lMq 图l不周Rt值下DNA-Cycl伊Hyp0-Hyp0体系的紫外吸收光谱 2．2KH2P04浓度对羟脯氨酸环二肽与小牛胸腺DNA相互作用的影响 攫长呻O 图2DNA．Cyclo-Hypo．Hypo体系的紫外吸收光谱随不同浓度KH2Pq的变化 mol·L．1、 30min后，体系紫外吸收光谱的变化情况。图中a至f依次对应的KH2P04浓度为：0 mol·L．1。、O．1 0．0lm01．L．1、0．05 m01．L一、O．5mol·L．1、1．0m01．L一。由图可见，在加入磷酸根 以后ⅨqA．Cycl伊Hyp0-Hypo体系在260nm处的吸光度值均受到了明显的影响，随着磷酸 根浓度的增加，体系的吸光度值逐渐增大。磷酸根的加入减弱了羟脯氨酸环二肽与DNA 之间的减色效应，即磷酸根的存在削弱了羟脯氨酸环二肽与DNA之间的相互作用。由于 KH2P04与DNA上的磷酸基团竞争性地与羟脯氨酸环二肽结合，使体系减色效应减弱，由 此推断羟脯氨酸环二肽在DNA上的键合