卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2008。36(32)：14120—14121，14132 责任编辑 张蕾 责任校对 吴晓燕 卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响 张晓建 ，安志兴 ，李学斌 ，王清华 ，范彩云 ，杨丽芬 ，张涌2 (1．河南科技学院，河南新乡453003；2．西北农林科技大学生物工程研究所，陕西杨凌 712100) 摘要 [目的]为绵羊克隆试验中卵母细胞的体外成熟及去核时间提供参考。[方法]利用盲吸法结合荧光显微镜检查，对绵羊不同成 熟时间卵母细胞去核的效率及其后续重构胚的发育进行对比。[结果]体外成熟培养 l9～21h的绵羊卵母细胞在成熟率上显著高于体 外成熟培养l6～18h(P0．05)，在去核成功率上显著高于体外成熟培养22～24h(P0．05)；3个试验组在卵裂率、囊胚率上差异不 显著(P0．05)，但是体外成熟培养19～21h的试验组囊胚平均细胞数要显著高于其他2组(P0．05)。[结论]体外成熟培养19— 21h的卵母细胞较适于作为受体细胞进行绵羊核移植 ，可以显著提高囊胚的质量。 关键词 卵母细胞 ；成熟时间；绵羊核移植 ；去核 中图分类号 s826 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2008)32—14120—02 Effectsofin vitroMaturationTinleofOocytos onSheepNuclearTransferEfficiency ZHANGXiao-jianetal (HenanInstituteofScienceandTechnology，Xinxiang，Henan453003) Abstract 『Objective]Thestudyaimedtoprovidereferencesforthetimeofoocytematurationnvitroandenucleationinthecourseofsheepnu— cleartransfer(NT)．M『ethod1Comparedtheeffectsofdifferentmaturationtimeofoocytesonenucleationefficiencyandreconstructedembryo developmentbymenasofblindenucleationandfluorescencemicroscopy．fResult]TreatmentofIVM (nvitromaturation)19—21hwassignm． camlyhi erthna IVM 16—18htreatmentjnoocy~ematurationrate(P0．05)andwassignificantlyhigherhtanIVM22—24htreatmentinenll- cleationrate(P0．05)．Threetreatmentshadnosignificnatdifferenceincleavagerateandblastocystrate(P0．05)，butIVM19—21htreat- mcntwassignificantlyhigherthantheother2treatmentsinaveragecellnumberofblastocysts(P0．05)．[Conclusion]111eappropriateinvitro maturationtimeofoocyteswas19—21hforsheepnucleartransfer，whichcouldsignificnatlyimprovehtequalityofblastocystsaccordingtohte cellnumberperblastocyst(P0．05)． Keywords Oocyte；Maturationtime；Sheepnuclera transfer；Enucleation Gurdon等用爪蟾 、Diberardino和Orr 用蛙分化的 醇)中，在38．5℃、5％CO、饱和湿度条件下培养成熟。 细胞进行核移植获得蝌蚪，为哺乳动物体细胞核移植奠定了 1．4 供体细胞的准备 从直径大于6nMYl的卵泡中捡出绵 坚实的理论基础。科学家们对这一领域投入了大量 的关注， 羊卵母细胞后，将剩下的混合液离心清洗 3次(1500r／min， 20世纪90年代以来，体细胞核移植后代已在绵羊、山羊、牛、 每次5min)，得颗粒细胞，置于含 10％FBS