副溶血性弧菌外膜蛋白的提取与免疫鉴定.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2008，36(32)：14116—14117，14205 责任编辑 罗芸 责任校对 李洪 副溶血性弧菌外膜蛋 白的提取与免疫鉴定 居尔毅，宁喜斌 (上海海洋大学食品学院，上海201303) 摘要 [目的]为进一步确定致病性副溶弧菌共有的特异性抗原和保护性抗原奠定基础。[方法]通过小鼠毒力试验研究5株副溶血性 弧菌菌株对小鼠的致病性，比较在不同培养基和培养时间下所提取的外膜蛋 白的SDS—PAGE图谱并通过Westernblotting分析研究副溶 血性弧茵菌株的免疫原性。[结果]5株临床分离的副溶血性弧茵菌株明显对小鼠具有不同的致病性，同时能在兔血平板上形成明显的 溶血圈，为TDH阳性菌株。通过菌体免疫获得的多克隆抗体，与除副溶血性弧菌外的其他试验菌株均无交叉反应。Westernblotting分 析显示该多克隆抗体与5株致病性副溶血弧茵菌株可发生程度不等的阳性反应，提取的外膜蛋 白具有较好的免疫原性。[ 论]该研 究为制备有效预防副溶血性弧茵引起的疾病的菌苗提供了理论基础。 关键词 副溶血性弧菌；致病性；外膜蛋白；Westernblotting分析 中图分类号 $917．1 文献标识码 A 文章编号 o517—6611(2008)32—14116—02 Extraction andImmuno．identiffcation ofOuterM embraneProteinfrom ro／parahaemolyticus JUE卜yietal (CollegeofFoodScience，ShanghaiFisheriesUniversity，Shanghai201303) Abstract 『0biective]Theaimwastolay血efoundationforthefurtherdeterminationonthemutualspecificantigenandtheprotectiveanti- genofthepathogenic parahaemolyticus．[Method]rI11epathogenicityofthe5strainsof parahaemo 瑚tomousewerestudiedbythe micevirulenceexperiments．theSDS—PAGEmapoftheoutermembraneprotein extractedunderthedifferentmedium andculturetimewas comparedandtheimmunogenicityofthe parahaemolyticusstrainwasstudiedbythewesternblottinganalysis．IResultIThe5strainsof parahaemolytieushaddifferentpathogenicitytomouseobviouslyandcouldfoi／nobvioushemolyticcycleonrabbitbloodplate，beingTDHposi— tivestrain．Thepolyclonal antibodyobtainedbysrtainimmunityallhadnocrossreactionwithotherexperimentalstrainsexcept parahaemo— lyticusstrain．Westem blottinganalysisshowedthatthepolyclonalantibodycouldproducepositivereactionwiht the5strainsofpathogenic parahaemolyticustoadifferentdegreeandtheextractedoutermembraneproteinhadbetterimmunogenicity．1ConclusionlTheresearchpro— videdthetheoreticalbasisforthepreparationofthevaccinetopreventthediseasecausedbyhte parahaemolyticuseffectively． Keywords Vibrioparahaemolyticus；Pathogenicity；Outermembraneprotein；Western blottinganalysis 副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus