含有多个精氨酸序列的多肽自组装行为研究 - 中国科技论文在线.pdf

中国科技论文在线 含有多个精氨酸序列的多肽自组装行为研究1 许小丁，刘允，张先正，卓仁禧 武汉大学化学与分子科学学院生物医用高分子材料教育部重点实验室，武汉 (430072) E-mail:xuxiaoding2008@ 摘 要：本文通过多肽固相合成技术（SPPS ）合成了三种含有多个精氨酸序列的多肽，研 究这些多肽在二甲亚砜（DMSO ）中的自组装行为。利用透射电子显微镜观测了自组装以后 聚集体的形貌。使用圆二色谱仪、荧光分光光度计研究了这些多肽的自组装机理。实验结果 表明三种含有多个精氨酸序列的多肽可以在 DMSO 中利用多肽序列间的氢键作用以及芳香 基的　　 堆叠作用自组装形成纳米纤维。这些纳米纤维相互缠绕并通其表面张力结合溶剂分 子使整个体系形成稳定的超分子凝胶。 关键词：多肽 自组装；纳米纤维；超分子凝胶 1．引言 近年来，利用非共价键相互作用（如氢键作用、疏水性作用、静电作用以及π−π堆叠作 用等）的超分子自组装广泛应用于合成新的功能型材料[1-3]。超分子自组装通常分为自发型 和刺激刺激响应型两种。由于其自身的可控性，刺激响应型的超分子自组装备受研究者的青 睐。通过给与外界刺激，分子的自组装可以容易实现从溶液态到凝胶态（ sol-gel transition ） 或者凝胶态到溶液态（gel-sol transition ）的转变。这种优异的性能使得刺激响应型自组装在 组织工程[4]、药物控释[5]、伤口修复[6]以及抗菌[7]等领域有着广泛的应用。 多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质。它是分子结构介于氨基酸和蛋白质 之间的一类化合物，由多种氨基酸按照一定的排列顺序键合而成。与传统的生物应用材料相 比，多肽材料具有优越的生物相容性。自从Merrifield[8]发展了固相多肽合成（SPPS）技术 以来，探讨多肽的一级和二级空间构象的相互转变日益成为国内外的研究热点。由于多肽空 间构象的转变通常伴随着自组装行为的发生，因此可以通过外界的刺激（如温度、pH 、光 等）来调节多肽的空间构象，实现多肽自组装行为的可控性[9-11]。目前有关于多肽自组装 的研究很多，但是关于含有多个精氨酸序列的多肽自组装的报道很少。其原因主要包括两个 方面。第一是含有多个精氨酸序列的多肽在合成过程中容易出现三氟乙酰化，导致产品的纯 度不高。另外含有多个精氨酸序列的多肽在水溶液中可以电离并带有多个单位的正电荷。因 此分子之间的静电排斥作用很大程度上抑制其自组装。在本文中，我们使用抗三氟乙酰化试 剂（苯甲硫醚、苯酚和乙二硫醇混合物）得到了纯度较高的含有多个精氨酸序列的多肽。将 其溶解在有机溶剂（DMSO ）中，它们可以自组装形成具有纳米纤维微观结构的超分子凝胶。 圆二色谱和荧光发射光谱表明这三种多肽的自组装是通过多肽序列间的氢键作用以及芳香 基的π−π堆叠作用实现的。 2 ．实验和方法 2.1 多肽的合成 三种含有多个精氨酸序列的多肽都是在2-氯三苯甲基氯（有效氯含量为1.19 mmol/g） 树脂上合成的。具体合成步骤如下（从C 端到N 端）：取1.5 g 树脂放入装置中（Sigma-Aldrich 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20060486006 ）和武汉大学博士自主科研基金 （20082030201000010 ）的资助。 -1- 中国科技论文在线 Filtration ），分别用二氯甲烷（CH2Cl2 ）和N,N-二甲基甲酰胺（DMF ）洗涤三次，然后加 入DMF 浸泡 30 分钟，排走溶剂。然后向装置中加入溶有9-芴甲氧羰基（FMOC ）保护的 氨基酸和二异丙基乙胺（DiEA ）的DMF 溶液，搅拌反应1.5 小时，排走溶剂。然后加入12 mL 的20%哌啶/DMF （体积比）溶液到装置中并搅拌20 分钟脱掉氨基酸上的FMOC 保护基。 排走溶剂并用DMF 洗涤树脂三次。然后加入溶有FMOC 保护的氨基酸、DiEA、O-(1H-苯 并三唑-1-基)-N,N,N,N- 四甲基硫尿六氟磷酸盐（HBTU ）和1-羟基苯并三唑（HOBt ）的DMF 溶液，搅拌反应1.5 小时