芳香族氨基酸的配体交换毛细管区带电泳手性拆分研究论文.pdf

t届中图中西部地区色谱学术交流会 2006年8月 芳香族氨基酸的配体交换毛细管区带电泳 手性拆分研究 赵艳芳1一，赵亮1，蒋生祥1，李永民¨ (1、中国科学院兰州化学物理研究所，兰州7300002、中国科学院研究生院，北京100039) ■耍：以铜(II)一卅}氨酸配合物为手性分离选择剂，对苯丙氟酸．酪氨酸和色氟酸3种非衍生芳香族氨墓酸的手性对映体拆分进行了 mmol／L CuSO．和10 L-备氨酸的条件下。成功的拆分了苯丙氨酸．酪氨酸手性赢缺体，色氨酸手性对映体也得到部分分离：考察了电泳缓冲 液组成，pH值等影响分高效果的因素． ‘ 关健词：手性配体毛细管电泳；手性分离；扣备氨酸；氨基睃 ． 氨基酸的手性拆分在多肽、蛋白质的研究，有机化学不对称合成、医药、食品以及生命的起源、 发育、病变及衰老的研究中，均具有重要意义。在构成蛋白质的20种氨基酸中，只有苯丙氨酸、酪 氨酸和色氨酸3种芳香族氨基酸在紫外区有吸收，可用紫外光度法或紫外荧光法直接测定。上—氨基酸 长期以来被认为是生物体内唯一的氨基酸存在形式，但上述3种芳香族氨基酸的俨型光学异构体已 被发现存在于人的尿液和血清中川。为了准确测定生物体内这些氨基酸的刀一型光学异构体的含量， 必须建立相应的手性分离方法。分离氨基酸对映体的方法主要有高效毛细管电泳(HPCE)法、高效液 分离效率偏低等不足。毛细管电泳具有微量、灵敏和柱效高的特点，适合于氨基酸的手性分离。 Kuhn等哺1以手性冠醚为手性选择剂，采用毛细管电泳技术分离了这些氨基酸对映体。配体交换是分 离手性氨基酸的一种较早的方法，而利用CE进行手性化合物分离分析的第一例就是建立在金属络合 物配位体交换原理基础上的哺1。Gassman等哺1以铜(II)一卜组氨酸配合物，Schmid 天冬酰胺配合物作为电泳添加剂分离了多种未衍生化的及衍生化的氨基酸，此后，手性配体交换毛 细管电泳的应用报道日益增多。本文首次以铜(II)一}谷氨酸配合物作为手性选择剂，研究了3种 含有芳环结构的天然氨基酸的手性拆分，并考察了缓冲液pH值，铜(II)与}谷氨酸络合物浓度以 及摩尔比对氨基酸对映体拆分的影响。 1实验部分 1．1仪器与试剂 Ilm， BeckmanP／ACESystemMDQ毛细管电泳仪(美国贝克曼公司)，未涂层石英毛细管(ID．75 OD．375pm，河北永年光导纤维厂)，毛细管总长60．2cm，有效长度50cm。MettlerToledo320 pH 本文系国家自然科学基金(No和中国科学院“西部之光”资助项目 ‘通讯联系人赵艳芳，电话：093 1-4968262，E-mail：zyftoday@sohu．com 184 首届中国中西部地区色谱学术交流会 2006年8月 计(梅特勒一托利多仪器上海有限公司)。 华美生物工程公司)，乙酸铵、硫酸铜等试剂均为分析纯，所用水为二次去离子水。 1．2实验方法 两次运行之间用背景电解质冲洗2min。紫外检测波长为190 力进样0．2psi，3s。’ 2结果与讨论 在手性配体交换毛细管区带电泳分离中，手性配体L(通常为￡型氨基酸及其衍生物)与金属离 成的三元络合物稳定性不同，决定了它们在电泳力作用下迁移时间的不同，因而可以进行脱对映异 构体的拆分。 。 2．1缓冲液pH值的影晌 pH值是配体交换分离中的一个重要影响因素，pH值通过影响待测氨基酸以及手性配体的离解程 4．5-9．．0之间考察了pH值对三种氨基酸手性拆分的分离度的影响。结