白菜NAC转录因子BrcCUC3基因克隆及其对叶缘和主枝发育的影响.pdfVIP

《 Onlinesystem：hRp：HW~AN．jabiotech．org 表量生鞠技肃学报 农 业 生 物 技 术 学 报 —●啊 JournalofAgriculturalBiotechnol0gy 嘲 _ 2012，20(4)：337—346 罂跫 DOI：10．3969／j．issn．1674—7968．2012．04．001 研究论文 Article 白菜NAC转录因子BrcCUC3基因克隆及其对叶缘和主枝发育的影响 惠麦侠 张鲁刚 余祥 王晗 白金娟 何玉科 1西北农林科技大学园艺学院，早 作物生物学国家重点实验摩，杨凌 712100；2中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所， 植物分子遗传国家重点实验室，上海200032 通讯作者，lugangzh@163．corn：ykhe@sibs．ac．cn 摘 要 植物 NAC (矮牵牛NAM 基因、拟南芥ATAF1／2和 CUC2基因)转录 因子 CUP—SHAPED COTYLEDON(CUC)~家族成员在植物茎尖分生组织形态建成、器官边界分离、叶发育方面发挥着重要 作用。采用基因同源克隆的方法获得了白菜(Brassicarapassp．chinensis)基因BrcCUC3，并转化拟南芥 rabidopsisthaliana)做 了初步的功能鉴定。研究结果表 明，白菜BrcCUC3的编码区长 1008bp，编码 335 个氨基酸，基因结构分析显示BrcCUC3包含 3个外显子、2个 内含子，内含子剪接位点符合GT—AG规则。 氨基酸序列分析表明，BrcCUC3蛋白具有典型的植物NACdomain结构域。BrcCUC3编码区氨基酸序 列与其它植物的CUC3蛋 白有很高的一致性，尤其与甘蓝(Brasicaolerace 、萝 卜 aphanussativus)；~拟 南芥CUC3蛋 白高度一致，一致性分别达到98％，97％~H83％。在不同物种CUC3的系统进化树上， rcC 归属于双子叶植物分支的十字花科亚组，由不同植物2O条CuC3编码区氨基酸序列所建立的 系统进化树与真实的植物进化基本一致。荧光定量PCR分析结果表明，BrcCUC3在 白菜叶深裂株系叶片 中的表达量比叶全缘叶片中的高。利用根癌农杆菌 grobacteriumtumefaciens)浸花法转化拟南芥，获得了 转BrcCUC3基因的拟南芥植株。过表达 BrcCUC3的转基因拟南芥呈现叶缘出现裂刻、主枝增加的新表 型。初步说明该基因参与叶形和主枝的发育调控 ，为揭示 白菜叶形发育分子调控机制和通过基因工程创 制植物叶形新种质提供分子依据。 关键词 白菜 ，BrcCUC3基 因，NAC．domain，过表达 ，叶发育 ClongingofBrcCUC3from Brassicarapassp．chinensisandItsEffecton LeafMorphologyandInflorescenceStructure HUIMai—Xia ZHANG Lu—Gang YU Xiang2 W ANG Han2 BAIJin—Juan HEYu—Ke 1CollegeofHorticulture，NorthwestAgricultureandForestryUniversity，StateKeyLaboratoryofCropStressBiologyforAridArea，Yangling 712100，China；2NationalKeyLaboratory ofPlantMolecularGenetics，InstituteofPlantPhysiologyna dEcology，ShnaghainIstiuttesfor BiologicalSciences，ChineseAcademyofSciences，Shnaghai200032，China ‘Correspondingauthor，lu