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黑龙江农业科学 2008(6)：21～22
HeilongjiangAgriculturalSciences
中图分类号 ：$436．661．Q81 文献标识码 ：A 文章编号：1002—2767(2008)06—0021—02
抗药性二斑叶螨的分子标记初探
周星石
(哈尔滨市香坊区幸福镇人民政府 ，哈尔滨 150036)
1 材料与方法 50g，加 ddH O溶解后移人溴酚蓝溶液中，混匀后
加 ddH2O定容到 100mL，加 10NNaOH1～2滴，
1．1 供试叶螨品系
调制蓝色。于4℃冰箱 内保存备用。
供试二斑叶螨抗性品系：由敏感品系经过多代
1mg·mL叫溴化乙锭溶液 (EB)：．称取 1mg溴
抗性选育获得。
化 乙锭溶于 1mLddH20中。
1．2 化学药品与试剂
配制 1．2 琼脂糖凝胶 ：称取 1．2g琼脂糖 ，放
CTAB(溴化十六烷 三甲基铵)；琼脂糖 ，溴 乙
人三角瓶中，加入 1×TBE缓冲液 100mL，微波炉
锭 ；DL2000Marker；TaqDNA聚合酶、10×反应缓
溶解 ；待溶化好的琼脂糖冷却至 6O℃左右时，加入
冲液 、MgC12、DNTP。
EB溶液使其中浓度为 0．5 g·mL_。，混匀；将 电泳
1．3 仪器与设备
槽胶水平放置 ；选择适宜的点样梳 ，倒人厚度为 3～
PTC-200PCR扩增仪 ；FinePixS602ZOOM 数
5mm左右的琼脂糖凝胶溶液，放置 25min至胶完
码相机 ；微量移液枪 ；AirTech无菌操作台；JA2003
全硬化 ；小心拔出点样梳，将胶槽放入 电泳槽 ，点样
型电子天平 ；TCL-16G 型 台式离 心机；HH一4型数
孔一端靠近电泳槽的负极 ；加入 1×TBE缓冲液 ，叶
显恒温水浴锅 ；85—1型恒温磁力搅拌器等 。
面高于胶面 1～2mm，待用 。
1．4 基因组 DNA 的提取
取 1O L0．1 溴酚蓝点样缓冲液加入 PCR管
将适量二斑叶螨挑到滤纸上，放人漏斗 中。用
中，离心混匀 ；取 1O L混匀后的样 品加于 1．2 琼
灭菌水清洗一次后 ，将虫体装入 1．5mL离心管 中。
脂糖凝胶孔 中电泳 。8OV稳压 电泳 1h左右 ，254
向管 中加入 5O L提取缓冲液，置于--20℃冰箱中，
nm紫外灯下观察。
5rain后取出，用研磨棒捣碎 ，匀浆 ；研磨棒用 150
1_6 随机引物序列
L提取缓冲液冲洗；离心管置于 65℃水浴保温 1
所选用的随机引物
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