庆丰链霉菌生长在不含甘氨酸的培养基中,其细胞壁能很好地被溶菌酶 .pdf

遗 传 学报，9(3);172 ActaGeneticaSinica 庆丰链霉菌．原生质体的形成、 再生及融合重组的研究’） 王洪洲 郑幼霞 〔中国科学院上海植物生理研究所微生物室） 庆丰链霉菌生长在不含甘氨酸的培养基中，其细胞壁能很好地被溶菌酶溶解，释放出原生 质体。原生质体不仅可以在 Rz,%RM和 RG培养基上再生，而且在高渗庆丰链霉菌斜面抱子 培养基上也能再生，抱子也比较丰满。A54菌株的再生频率是 30.5%,A201菌株为38%p 原生质体在40C-贮存过夜，再生频率降低30%以上。PEG能有效地诱导庆丰链霉菌原生质体 融合重组，不同分子量的PEG诱导效果不一样，PEG1000的效果最好，重组频率可达i0-z11 和常规杂交相比，重组频率可以提高 10-1000倍。用 PEG诱导原生质体融合重组时，性因子 的存在与否对重组频率没有明显的影响。 1956年Romano等报道链霉菌属中一些种的细胞壁可以被溶菌酶溶解[131,Douglas 首先用溶菌酶从链霉菌菌丝制备出原生质体，并用对噬菌体吸附及血清学试验证明细胞 壁确实溶解国0随后 Okanishi等研究了链霉菌原生质体形成和再生成细胞形态的条件12‘10 1974年 Kao发现聚乙二醇 (polyethyleneglycol,PEG)能有效地诱导植物细胞的原生质体 融合10〔]，这一技术很快被用于真菌[61、细菌L7,131酵母菌[151细胞的原生质体融合，极大地促 进了微生物原生质体融合的研究。近年来有关链霉菌原生质体融合的研究已陆续有所报 道。1977年Hopwood等用PEG诱导天蓝色链霉菌A3(2)[StreAtomycesceolicolorA3(2)] 的原生质体融合成功，并得到较高的重组频率19joPEG不仅对同一种链霉菌不同衍生株 (intraspecies）的原生质体之间，而且对不同种链霉菌菌株之间 i（nterspecies）的原生质体融 合重组181都表现明显的诱导作用。原生质体融合重组由于其重组频率较高，并有可能导 致异源 DNA 间的重组，而为遗传分析提供了一个有利手段，在育种实践中探讨新的育 种途径，这对基础遗传学和应用遗传学的研究均有重要的意义，因此已经成为当前生物学 领域中令人瞩 目的问题之一。 链霉菌属是重要抗生素的主要来源，与人类有着密切的关系。但迄今为止，除了少数 几个菌株以外，有关链霉菌遗传学方面的知识积累还较少。发展链霉菌原生质体融合技 术，对探索链霉菌遗传基本规律、阐明抗生素产生的遗传学及其生物合成途径和开辟新的 育种方法等都会产生积极的作用。近年来，我们对庆丰霉素产生菌— 庆丰链霉菌的原 生质体形成、再生的条件以及不同菌株之间的原生质体以PEG为助融剂的融合重组进 行了研究，这里报道部分实验结果。 本文于1981年4月30日收到。 1)本工作承焦瑞身教授指导，特致谢忱：刘培莉同志参加本实验技术工作。 3期 王洪洲等：庆丰链霉菌原生质体的形成、再生及融合重组的研究 173 材 料 和 方 法 一（）菌株 本实验所用菌株均为本实验室用 NTG诱变处理所得，其性状见表 10 表 x 菌 株 描 述 Table 1 Descriptionofstrains 菌 号 表 型 质 粒 状 态 Codesofstrains Phenotvne Plasmid status A54 M et` SQP1一 A201 11v一 SQ[1} A544