一种预染色凝胶电泳法的研究.pdf

第37 卷 第7 期 核 技 术 Vol.37, No.7 2014 年7 月 NUCLEAR TECHNIQUES July 2014 钟睿博 刘雨双 张 萍 刘竟然 赵国芬 张 峰 （内蒙古农业大学生命科学学院 呼和浩特 010018 ） 凝胶电泳是常用的生化分离鉴定技术。生物分子大多在可见光区完全透明，因此在凝胶电泳之后，需 要对凝胶进行染色处理才能观察到结果，而且常规的染色方法一般步骤比较繁琐耗时。本文开发了一种新型 的预染色凝胶电泳方法(Pre-Staining Gel Electrophoresis, PSGE)，可以直观地显示电泳结果，并简化凝胶电泳操 作。利用 PSGE 成功分析了蛋白质与两性高分子聚合物的共价偶联和物理吸附的效率，展示了 PSGE 的巨大 应用开发潜力。 琼脂糖凝胶电泳，预染色，共价偶联，物理吸附，蛋白质，两性高分子聚合物 TL271+ .99 DOI: 10.11889/j.0253-3219.2014.hjs.37.070501 凝胶电泳(Gel Electrophoresis)是一类生化实验 操作过程。如果在进行电泳之前将染料分子牢固地 室通用的分离分析技术。按照电泳所用的介质，有 结合到被分析的分子上，就可以将此步骤简化，从 琼脂糖凝胶电泳(Agarose Gel Electrophoresis, AGE) 而提高电泳的效率。本文针对这个问题提出了一个 和聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide Gel 创新的技术——预染色凝胶电泳(Pre-Staining Gel Electrophoresis, PAGE) 。在实验中，除了要求被分 Electrophoresis, PSGE) ：以考马斯亮蓝(Coomassie 离的物质带电之外，选择这两种电泳的一般原则是 Brilliant Blue, CBB)预染牛血清蛋白(Bovine Serum 根据被分离物质的分子量或者粒径大小而决定的。 Albumin, BSA) 和以胶体金纳米颗粒 (Gold 一般琼脂糖形成的凝胶胶孔（依赖于凝胶浓度 Nanoparticles, AuNPs)预染/标记两性高分子聚合物 [1−2]要大于聚丙烯酰胺形成的凝胶的孔 (Amphiphilic Polymer, AP)为例，证实了PSGE 法可 50−200 nm ） 径范围[3−4] 。像量尺的最小刻度必须小于被测量的物 以直观地分析出BSA 与AP 的共价偶联效率，并可 体才能进行测量的道理一样，当被分离/分析分子的 以实时地观察到其二者的强烈物理吸附作用。 粒径与凝胶的孔径大小基本在同一尺度范围时，才 能获得最佳的分辨率。所以，通常分子量较大的核 1 酸样品选用琼脂糖凝胶，而分子量较小的蛋白质样 1.1 品则选用聚丙烯酰胺凝胶。在制备这两种凝胶的过 程中，琼脂糖凝胶相对简单，只需要加热后冷却即 1.1.1 AP 合成 可，不像聚丙烯酰胺凝胶需要复杂的聚合单体与聚 AP 合成的方法参照文献[6−7] ，简单描述如 合引发剂等的准确配比，以及由于胶体太软需要另 下：称取2.7 g 十二胺溶于100 mL 四氢呋喃(THF) 。 外一种浓缩胶制作加样孔等的复杂制备程序。所以 称取3.084 g 聚异丁烯马来酸酐放入圆底烧瓶中，将 如果能利用琼脂糖替代聚丙烯酰胺的话，可以大大 十二胺溶液倒入其中与聚异丁烯马来酸酐混合，超 简化实验操作过程。